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会计学1实验三感受态细胞制备 实验目的实验原理实验仪器材料实验步骤实验结果讨论第1页/共8页 实验目的学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞第2页/共8页 原理生理状况下，细菌质粒可通过接合(Conjugation)、转导(Transduction)、方式转入到另外的细菌。实验条件下，细菌如果能吸收周围环境中的DNA，必须使细菌具备一个特殊的状态——感受态（competent）。DNA是亲水性分子，不容易穿过细菌的细胞膜。可以让细菌悬在0℃， CaCl2低渗溶液中，这样细胞膜胀成球形，丢失部分膜蛋白，成为容易吸收外源DNA的细胞——感受态细胞(Compenent cells)。?第3页/共8页 一：受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于50ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝左右。 第4页/共8页 二：感受态细胞制备1001: 将培养液转入EP管，冰上放置20 min2: 4℃离心5 min，4000rpm，弃上清3: 加入预冷的CaCl2 ，冰上放置30 min4: 4℃离心5 min，4000rpm，弃上清5:加入预冷的CaCl2 ，悬浮细胞，放4℃保存第5页/共8页 实验仪器和试剂实验仪器恒温摇床超净工作台冷冻离心机实验试剂大肠杆菌DH5αLB液体培养基 CaCl2溶液第6页/共8页 实验注意事项细胞一旦离开培养基，实验操作要轻柔（加液，悬浮细胞），以免造成菌体破裂，影响转化整个实验过程中注意将细胞置于冰上第7页/共8页