章植物细胞工程.pptxVIP

会计学1 第一节 基本概念 1 植物细胞的全能性（Totipotency） 2 植物组织和器官培养 3 植物的分化 胚胎发生（从精卵结合到种子） 器官发生（从种子到植物体） 4 植物的脱分化：已分化为组织器官的细胞 离体条件下变成未分化的细胞和组织的过程 5 植物的再分化：脱分化的愈伤组织再分化形成胚状体或愈伤组织直接分化为胚状体第1页/共47页 第2页/共47页 6 植物无菌培养 植物培养 愈伤组织培养（由外植体脱分化） 悬浮培养 离体器官的培养 胚胎培养 7 细胞培养 得到单个细胞无性繁殖系第3页/共47页 8 分生组织培养（生长锥培养） 9外植体 10 无性繁殖系 11 突变体 12 继代培养（subculture) 13初级代谢物 ，次级代谢物和次级代谢作用 第4页/共47页 第二节 植物细胞工程发展简史一， 20世纪初德国植物学家Haderlandt提出植物细胞的全能性和离体培养的观点。发展了植物细胞培养技术，包括：植物微繁殖技术（试管和人工种子）细胞杂交技术体细胞变异和选择种子保存技术植物细胞大量培养技术第5页/共47页 第6页/共47页 48 利用植物作为生物反应器生产油脂、蔗糖和蛋白质第7页/共47页 二 基本的程序从完整植物体取得植物组织外植体培养诱导愈伤组织进行脱分化建立细胞株原生质体培养液体悬浮培养和深层大规模培养 第8页/共47页 第9页/共47页 三 已有200余种植物培养细胞，可生产300多种人们需要的产品黄连的培养生产小蘖碱紫草的培养生产紫草素人参培养生产人参皂苷黄花蒿培养生产青蒿素红豆杉培养生产紫杉醇第10页/共47页 第三节 植物细胞的形态及生理特征一 植物细胞形态二 植物细胞的结构特征三 植物细胞的生理活性物质 酶类、维生素、植物激素、植物杀菌素、生物碱、糖苷、挥发油、有机酸第11页/共47页 四 植物细胞的生理特征细胞团的产生抗张力强、抗剪切力弱供氧要控制，必要时通二氧化碳光照防止泡沫产生，包埋细胞防细胞黏附于反应器第12页/共47页 第四节 植物细胞培养的基本技术材料制备培养基制备培养方法选择第13页/共47页 一 植物材料的准备1 外植体的无菌处理2 外植体的培养第14页/共47页 第15页/共47页 第16页/共47页 108 清洁液的三种配方第17页/共47页 二 培养基及组成1 无机盐： 大量元素——浓度大于30mg/L的无机元素 微量元素——浓度小于30mg/L的无机元素2碳源：糖类、肌醇、甘油等3植物生长调节剂 生物素、分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯4 有机氮源 蛋白质水解产物和各种氨基酸5 维生素第18页/共47页 三 培养方法1 培养方式：原生质体培养单倍体细胞培养固体培养液体培养悬浮培养固定化培养第19页/共47页 2 植物大规模培养系统（1） 成批培养法：一次性将培养基加入反应器中，接种培养后收获细胞的培养系统。 改进：气升式反应器,以通气体代替搅拌 两步培养法：一个反应器用于细胞量的积累，另一个反应器生产次级代谢物（2） 半连续培养法 在反应器中投料和接种培养一段时间后，将部分培养液和新鲜培养液进行交换的培养方法第20页/共47页 （3）连续培养法 在投料和接种培养一定时间后，以一定速度连续采集细胞核培养液，并以同样速度提供新鲜培养液以使细胞生长环境保持恒定的方法。 改进：二阶段连续培养法（4）固定化培养法 固定化反应器：网状多孔板，尼龙网套和中孔纤维膜等第21页/共47页 第五节 影响植第物次级代谢物累积的因素影响因素：生物条件物理条件化学条件工业培养条件第22页/共47页 2 影响培养细胞次代谢产物产生的各种因素第23页/共47页 一 外植体的选择不同外植体的悬浮细胞培养物，其最大次级产物的累积时间不同第24页/共47页 第25页/共47页 二 培养条件的影响1 培养环境的内在因素接种和诱导培养基组成植物生长调节剂供氧和pH第26页/共47页 2 两步法培养第一步采用适合细胞生长的培养基——生长培养基第二步采用适合次级代谢产物合成的培养基——生产培养基第27页/共47页 3 培养环境的外部因素温度搅拌频率培养容器光照影响第28页/共47页 第六节 植物细胞培养的反应器植物细胞的特性细胞体积大抗剪切能力差培养时间长呼吸率低，对氧要求低第29页/共47页 根据通气和搅拌类型，生物反应器分为：摇瓶反应器搅拌型生物反应器环流生物反应器和鼓泡塔生物反应器第30页/共47页 第31页/共47页 一 机械搅拌生物反应器二 鼓泡塔生物反应器三 气升式生物反应器四 转鼓式生物反应器五 固定化生物反应