上转换发光纳米材料在图像定量分析中的应用研究.pdfVIP

上转换发光纳米材料在图像定量分析中的应用研究 摘 要 上转换纳米粒子（UCNPs ）因其具有高的光稳定性,无光闪烁以及背景低等优点， 被广泛地应用于分析检测特别是光学成像等研究领域。全内反射 （TIR ）成像利用全 内反射产生的倏逝波激发样品,从而使样品表面仅数百纳米内的发光团被选择性地 激发，然后利用高灵敏度、高时间分辨率的相机捕捉发光信号，从而可获得高信噪 比的成像效果。本文结合上转换发光材料和全内反射成像技术，构建了UCNPs-TIR 检测平台，在此平台上开发了具有响应速度快（~ 0.1 s ）、样品用量少（10 μL ）和 数据量大 （550 帧时间序列图像）的图像定量分析法，并建立了亚硝酸盐（NO2- ）、 HIV DNA 的定量检测方法。具体如下： （1 ）设计合成了新型花菁染料（IR-790 ）及核壳型 NaYF :Yb,Tm@NaYF 4 4 UCNPs ，构建了复合发光纳米探针，结合基于上转换发光全内反射成像建立的图像 定量分析法，建立了近红外区检测NO2- 的新方法。利用共沉淀法合成了六方相的核 壳型NaYF :Yb,Tm@NaYF UCNPs ，用四氟硼酸亚硝（NOBF ）修饰使其从油相转 4 4 4 化成水相。由于 NaYF :Yb,Tm@NaYF UCNPs 的发射光谱和新型花菁染料 IR-790 4 4 的吸收光谱之间存在光谱重叠，UCNPs 的能量转移给 IR-790，导致UCNPs 发光猝 灭，而加入亚硝酸盐后，阻碍了能量转移的过程，UCNPs 发光恢复，基于此原理实 现了NO2- 的检测。在最佳实验条件下，检测范围为0.20-140 μM，检出限为0.030 μM 。 该方法已成功应用于环境水及香肠中亚硝酸盐的检测。 （2 ）设计合成了核壳型NaGdF :Yb,Er@NaYF UCNPs ，结合磁珠分离技术并基 4 4 于上转换发光全内反射成像建立的图像定量分析法，建立了红区检测人类免疫缺陷 病毒 (HIV) 相关 DNA 的新方法。利用共沉淀法合成了六方相的核壳型 NaGdF :Yb,Er@NaYF UCNPs ，接着用磷脂-聚乙二醇-羧基（DSPE-PEG-COOH ）对 4 4 上转换纳米粒子进行表面修饰使其从油相转化成水相。羧基修饰的 NaGdF :Yb,Er@NaYF UCNPs 与单链DNA 连接形成报告探针，磁珠与另一单链DNA 4 4 连接形成捕获探针，报告探针和捕获探针与目标 HIV DNA 通过碱基互补配对形成 UCNPs-DNA-MBs 纳米复合物，经磁选后，UCNPs-DNA-MBs 纳米复合物的发光强 度与目标HIV DNA 的浓度相关，基于此原理实现了HIV DNA 的检测。图像定量分 析的线性范围为0.02-30 nM ，检出限为0.010 nM 。该方法已成功应用于人血清中HIV DNA 的检测。 （3 ）设计合成了核壳型 NaYF :Yb/Er/Nd@NaYF :Nd UCNPs ，结合花菁染料 4 4 IR-813，构建了染料敏化上转换发光纳米探针，初步探究了其在上转换发光全内反射 I 平台上的成像。利用共沉淀法合成了六方相的核壳型 NaYF :Yb/Er/Nd@NaYF :Nd 4 4 UCNPs ，在其表面修饰四氟硼酸亚硝（NOBF4 ）并利用染料增敏上转换发光强度。 808 nm 激光激发的UCNPs 可大大减轻980 nm 激光造成的热效应，可有效