《免疫学实验》课件-酶联免疫吸附试验(ELISA) 窦环上课用.pptVIP

间接法测定抗体 检测抗体最常用的方法，常用于传染病的检测。 已知 抗原 双抗体夹心法 可用于检测双价或双价以上的大分子抗原。 用特异性抗原进行包被和制备酶结合物。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备，应根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。 亦可用于检测抗体： 竞争法 竞争法测定抗体：将抗原吸附在固相载体表面；加入酶标抗体和待测抗体，竞争结合抗原；对照只加入酶标抗体；加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗体量。 因此，结合于固相的酶标抗体量与受检抗体的量呈反比。 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。 竞争法测抗原：小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。 ELISA基本过程： 抗原吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测抗体, 再加相应酶标记抗体，生成抗原--待测抗体--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。同理也可包被抗体，测定抗原含量。 3. Elisa试剂 ELISA实验中需要的试剂： （1）* 已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）； （2）* 酶标记的抗原或抗体（结合物）； （3）* 酶的底物