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植物离体受精 C 1. 基本概念和意义 O N 2. 离体传粉 T 目 E N 录 3. 离体受精的基本过程 T S 1 基本概念和意义 （1 ）基本概念 指在无菌培养条件下 ，培养 未受精子房、胚珠和花粉 ，使 花粉萌发进入胚珠 ，完成受精 的技术。 1 基本概念和意义 （2 ）意义 理论方面：对授粉的生理生化机制及早期胚胎发育进行研究。 应用方面：克服远缘杂交丌亲和性或克服自交丌亲和性。自交丌亲和性植 物在受精过程中的障碍通常发生在柱头或花柱中 ，由于花粉不柱头识别反 应导致花粉管生长受到抑制 ，丌能进入柱头或在花柱中生长停滞 ，以致受 精失败。 2 植物离体传粉 （1 ）子房离体授粉 通过人工授粉方法,使花粉粒不经柱头和花柱 ，在子房腔内萌发，直接进入子 房中的胚珠,完成受精作用,从而获得远源杂种。 方法: ①直接引入法:在子房壁或顶端切个开口,灌注以花粉悬浮液,完成授精过程 ，再离 体培养。 ②注射法:在子房顶端和基部开2个注射孔，用装有花粉悬浮液的注射器从顶端注 射, 值到基部孔有流出;用凡士林封闭孔口,再离体培养。 2 植物离体传粉 （2 ）胚珠试管受精 ①直接法：直接在胚珠表面授予无菌花粉，再离体培养； ②间接法：预先培养花粉，将花粉撒在培养基表面，再接种带有胚座的 裸露有胚珠于花粉培养基上，完成授精过程。 3 植物离体受精的基本过程 （1 ）精细胞获得 ①研磨法：利用匀桨器 ，使花粉壁破裂而释放出精细胞。 ②渗透压冲击一步法：蒋花粉置于适宜渗透压条件下自行破裂 ，释放出精细胞。 ③渗透压冲击二步法：先将花粉在一定浓度蔗糖溶液中水合一段时间 ，再加入 等量蒸馏水造成渗透压骤降 ，促使花粉破裂 ，释放出精细胞。 ④活体-离体技术：先对柱头进行人工授粉 ，当花粉管在柱头生长到一定程度后 ， 切下1cm左右一段 ，插入液体培养基中培养 ，待精细胞出现后 ，用酶液水解 ， 低渗液冲击使花粉管破裂 ，释放出精细胞。 3 植物离体受精的基本过程 （2 ）卵细胞分离 目前，从胚囊或胚珠中分离少量卵细胞已获得成功。 ①酶解法：利用水解酶分离出胚囊，将单个胚囊内细胞相互分开，可得到离散的 游离卵细胞，通过微吸管挑选出卵细胞 ②酶解法--压片法：酶解胚珠后再轻压，挤出卵细胞 ③酶解--解剖法：胚珠先经酶解处理，再在倒置显微镜下从胚珠中解剖出卵细胞 3 植物离体受精的基本过程 （3 ）人工合子制备 （1）微电融合：在电泳作用下，使细胞氧化还原电位发生变化，细胞正负相 吸，再在脉冲电场作用下，两个细胞膜临时穿孔，细胞膜重新粘连，形成完整 细胞。目前只有用这种方法融合的产物再生了植株。 （2）高钙-高pH介导融合：钙离子有利