《微生物学》第10章 微生物与基因工程.ppt

* * 野生大肠杆菌（E.coli）的基因组DNA中有470万个碱基对（bp），内含4288个基因。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组分的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有可塑性。 大肠杆菌基因组组成 与基因重组相关的基因型（如recA、recB和recC等） 与甲基化相关的基因型（如dam、mcrB和C、hsdM等） 与点突变相关的基因型（如mutS、mutT、和uvrB等） 与核酸内切酶相关的基因型（如hsdR、hsdS和endA等） 与终止密码子相关的基因型（如supE和supF） 与抗药性相关的基因型（gyrA、rpsl和Tn5等） 其他与能量代谢、氨基酸代谢、维生素代谢等相关的基因型 利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或者缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型（Phenotype），把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype）。这些不同基因型特性的菌株在基因工程的研究和生产中具有广泛的应用价值。基因工程中，经常使用的大肠杆菌几乎都来自于K-12菌株，也使用由B株和C株来源的大肠杆菌。 优点 遗传背景清楚、载体受体系统完备、生长迅速、培养简单、重组子稳定 缺点 产结构复杂、种类繁多的内毒素 用途 是基因工程主要原核受体菌。外源DNA克隆和扩增；原核基因高效表达；基因文库构建。 大肠杆菌在基因工程中的作用及特点 枯草芽胞杆菌 革兰氏阳性菌，无荚膜，周生鞭毛，能运动，需氧型 芽孢椭圆到柱状，0.6～0.9×1.0～1.5微米，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。 表面色暗，有皱褶状，不透明 二、枯草芽胞杆菌基因组 枯草芽胞杆菌在纯培养的镜下形态(革兰染色) 枯草芽胞杆菌 枯草芽孢杆菌全基因组大小为3 925 958 bp，GC含量为46.4%。 预测所得CDS数为4 056个，Coding区域的长度3 491 649 bp 152个串联重复区域，平均拷贝数为4.38882，转座子103个，IS序列数量37个 三、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)基因组的测序 S. cerevisiae是一种重要的模式生物，也是第一个被测序的真核生物。它有16条染色体，基因组全长为12Mb，含有6000多个基因。它的基因组的测序是作为HGP的一部分于上世纪80年代末期启动，于1996年完成。1997年《Nature》专门为S. cerevisiae基因组发行了增刊。 内容丰富详实， 为研究yeast基因 组必读之书。 S. cerevisiae基因组的测序被称为现代分子生物学历史上最为分散的实验。包括美国、加拿大、欧洲、日本等国家在内的100多个实验室，超过600多名科学家都参与了这项工作。 酵母菌研究社群(the yeast community)，在杰出的组织者 Andre Goffeau教授(the Universite Catholique de Louvain in Belgium)的领导下，树立了一个效率，合作，组织的典范。这样一种国际合作也是基因组学研究的一个重要特点。 基因组测序 和组装流程 五、微生物基因组的测序 生物信息学分析流程图 基因功能注释 基因注释主要基于蛋白序列比对，将基因的序列与各数据库进行比对，得到对应的功能注释信息。 注释的蛋白库为：KEGG、COG、SwissProt、TrEMBL、NR。 1、重组微生物工程菌与人类药物生产 基因工程产品约有2/3用于人类疾病治疗和预防性用药，它给制药工业带来了革命性的变化。据估计，人用蛋白药物的全球市场，每年可达200亿美元，而且还在持续增长。在这种巨大利益驱使下，世界各大制药公司相继投入巨资用于这些重组蛋白药物的研究开发。 （1）重组人胰岛素生产 胰岛素是由人和动物的胰脏β-胰岛细胞合成的蛋白质，是治疗胰岛素依赖型糖尿病的特效药物。 1982年，美国Ely Lili公司使用重组大肠杆菌生产人胰岛素，这是第一个上市的基因工程药物。 六、微生物基因工程的应用 （2）重组人生长激素生产 人生长激素（hGH），又叫做促生长素，具有调节生长与发育的功能，对多种人类疾病诸如垂体性侏儒症、特纳氏综合症、组织坏死等，都具有良好的治疗效果。 hGH的来源是从死人的脑垂体中提取，这种制备方法不仅材料来源困难，无法大量生产，而且存在安全性问题。 1985年，这种由 E.coli 生产的rhGH已成为得到美国政府许可生产和使用的第二种基因工程药物. （3）重组人干扰素生产 干扰素是最早发现的细胞因子，早在1957年英国医生发现流感病毒处理的细胞产生一种因子，可