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肺炎支原体及耐药多重RTPCR检测试剂的研究（免疫学范文） 文档信息 ： 文档作为关于“研究报告”中“农林牧渔”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文10160字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 2 文1：肺炎支原体及耐药多重RTPCR检测试剂的研究 2 1材料与方法 3 （1）肺炎支原体（Mp）优选的引物和探针分别为： 3 1.2方法 4 1.2.1总RNA的提取 4 1.2.2RT-PCR反应 5 2试剂盒的组装和验证 5 2.1试剂盒的组装及操作 5 2.1.1试剂盒的组分 5 2.1.2试剂盒的操作方法 5 2.1.2.1病毒RNA的提取 5 2.1.2.2RT-PCR反应 6 2.2试剂盒的验证 6 2.2.1试剂盒分析性能的研究 6 2.2.1.1试剂盒精密度的研究 6 2.2.1.2试剂盒突变最低检测限的研究 7 2.2.1.3试剂盒灵敏度的研究 7 2.2.1.4试剂盒荧光相互干扰的研究 7 2.2.1.5试剂盒准确度的研究 8 2.2.1.6试剂盒特异性的研究 8 2.2.1.7试剂盒抗干扰性能的研究 8 2.2.2试剂盒分析性能的研究 8 2.2.2.1试剂盒实时稳定性的研究 8 2.2.2.2试剂盒模拟运输稳定性的研究 9 2.2.2.3试剂盒开瓶稳定性的研究 9 2.2.2.4试剂盒37℃稳定性的研究 9 2.2.2.5试剂盒冻融稳定性的研究 10 3结论与讨论 10 文2：CFL2基因半定量多重RTPCR检测方法的建立 10 1 实验材料与方法 12 2 结 果 13 2.2 CFL2和GAPDH多重RT-PCR条件的优化 13 3 讨 论 14 参考文摘引言： 16 原创性声明（模板） 17 正文 肺炎支原体及耐药多重RTPCR检测试剂的研究（免疫学范文） 文1：肺炎支原体及耐药多重RTPCR检测试剂的研究 肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，MP）是一种常见的呼吸道病原体，通常导致轻微的上呼吸道感染，如喉咙痛、咽喉炎和气管炎[1]，其引起的肺炎占非细菌性肺炎的50%，还可引起肺外并发症，累及一个或多个系统、器官，如皮肤、胃肠道、心血管、骨骼肌肉和肾脏，严重时可致中枢和外周神经系统病变，甚至死亡。其潜伏期较长(2-3周)，而且传播率较低，导致流行期可持续1年左右，继而维持数年低发病率，3-7年后再出现流行高峰[2-3]。其主要通过飞沫以气溶胶形式传播，存留在鼻、喉、气管和痰液中，密切接触可能引起肺炎支原体的暴发[4]。肺炎支原体无细胞壁，因此，对影响细胞壁合成的抗生素如青霉素等不敏感，但是，对影响细菌蛋白合成的抗生素如大环内酯类、喹诺酮类等敏感[5]。因此，大环内酯类是治疗肺炎支原体感染的首选药物，它可结合于肺炎支原体核糖体50S亚基的转肽酶中心与肽输出通道之间的部分，通过机械阻塞通道而抑制肽链的延伸，从而达到抑制蛋白合成的目的，其结合位点由23SrRNA结构域Ⅴ的核苷酸构成，其中2063和2064位点是主要的组成部分[6-7]。近年来，随着大环内酯类抗生素的广泛使用，临床分离出了耐药菌株，提示肺炎支原体耐药现象的存在[8-9]。国内外的研究表明，产生耐药的肺炎支原体在23SrRNA序列上发生点突变，其中，最常见的是2063位点A到G的突变，2064位点A到G的突变[10] 目前，临床上对肺炎支原体耐药性的检查，主要是依靠肺炎支原体的分离及药敏实验，由于肺炎支原体分离较为困难，所以灵敏度较低，而且耗时耗力，不利于及时指导用药[11]。本研究拟采用的荧光PCR技术，操作简便、检测迅速、检出率高，通过一次试验即可明确是否有肺炎支原体感染及所感染的肺炎支原体是否耐药，有利于对疾病进行及时诊断及合理选择治疗方案，与传统分离培养检测技术相比，提高了检出效率、降低了漏检率，有利于对疾病进行及时诊断及合理选择治疗方案，可对多种临床样本进行高效可靠的筛查，以及对临床病情和用药效果进行监测，指导合理用药。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1临床样本：病人的痰液样本。 1.1.2引物和探针：根据肺炎支原体标准株的P1基因与23SrRNA序列，从NCBI数据库目的基因片段序列，利用AlleleID软件设计多重扩增体系采用的引物探针，上海生工公司合成，其序列为： （1）肺炎支原体（Mp）优选的引物和探针分别为： 上游引物 MpF:GGAATCCCAATGCACAA