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第八章 污染物生物毒性和致突变性的微生物学监测方法;;毒性试验常用参数;;检测毒性的手段：动物检测、微生物检测 动物检测急性毒性：研究化学物质大剂量一次染毒或24小时内多次染毒动物所引起的毒性的试验。 其目的是短期内了解该物质的毒性大小和特点，并为进一步开展其他毒性试验提供设计依据。 急性毒性试验类型 哺乳动物急性毒性试验 水生生物急性毒性试验 蚯蚓急性毒性试验 观察时间为2周，以半数致死浓度LC50表示。;微生物检测选择一项或几项生理指标为指征，根据代谢物影响或抑制这些指征的程度来判断毒性的强度。 评价指标多为EC50或IC50;一、发光细菌—细菌生物发光抑制试验 细菌生物发光的生物学机制： FMNH2 + RCHO +O2 FMN + H2O + RCOOH + 光 420-670nm的可见光 细菌生物发光抑制试验是国际标准化组织认可，也列为我国水质评价的国家标准方法。;（一）试验原理 毒物→细菌荧光素酶活性或细胞呼吸受到抑制→发光能力减弱（比例关系） → 光电测定装置→测出发光强度的变化 菌株：应用最多的是明亮发光杆菌 美国贝克曼 (Beckman) 公司制造的微量毒性分析仪就是一种发光细菌检测仪，操作极为方便，测定一个样品不到半小时，所得结果与鱼类毒性试验一致。（Microtox）,国际通用，使用最为广泛的微生物学检测方法。 冻干菌种：筛选、培养的明亮发光杆菌，真空冷冻干燥（加保护剂，缓冲物质，NaCl等），-20—25°C保存。;（二）试验方法 菌种复苏：2%NaCl，悬液 样品处理：系列稀释，调pH6-8，渗透压2%NaCl 毒性测定：测试管加入样品和菌液，以苯酚作阳性有机毒物对照，以ZnSO4.7H2O作阳性无机毒物对照，蒸馏水为阴性对照。15oC培养5min或15min。光量抑制百分率： （阴性对照组指标值-实验组指标值） 阴性对照组指标值 通过回归方程计算IR为50%时的样品剂量，IC50 质量控制：同一剂量平行管间的发光强度差异值小于20%，苯酚和硫酸锌的IC50有一定范围。;（三）方法评价 与传统鱼类96h毒性试验相比具有良好的一致性。 1991年Diane对100种化学物质的毒性测试结果表明两者的相关系数达0.85。 可以根据细菌生物发光试验的??光抑制率进行毒性分级。 各实验室间结果的重现性好 可用于生物传感器分析;国际标准化组织将该方法作为检测化合物或废水毒性的标准方法之一（ISO 9509）。 （一）试验原理 毒性污染物抑制硝化作用的酶类，导致对底物的利用能力或产物的生成量下降。通过测定底物或产物的变化来检测毒性作用的程度。 利用亚硝化单胞菌或硝化杆菌属，或用活性污泥。;（二）试验方法（以硝化杆菌属为例） 增殖细菌至108个/ml。 加入菌液、NaNO2溶液及样品（不同浓度），以蒸馏水为对照。 培养（30oC4h)、检测NO2- 比较样品组与对照组硝化作用强度，可得IC50 与Microtox灵敏度相当，与鱼类毒性试验结果的相关性为0.45。;美国国家环保局认可的毒性测试方法。 （一）实验原理 藻类对水体污染反应十分敏感。毒物抑制光合作用，藻类生长量减少。常用硅藻、栅藻、小球藻。 （二）试验方法 繁殖藻种 配制培养基，灭菌。加入待测物，接种。 培养。恒温（28-30°C），光照。 测定生长量（或其他指标），绘制生长曲线。 计算最大生长率。（μmax） （三）结果与评价;又称为微型生物群落监测法，广泛用于水环境的毒性监测与评价。微生物包括细菌、真菌、原生动物、藻类及小型轮虫。国家标准：水质微型生物群落监测 PFU法( (GB/T 12990-91) （一）试验原理 正常条件下自然水环境的微型生物群落种类、分布、构成有一定规律，外界环境因素的干扰下，群落的平衡被破坏，结构特征也随之变化。通过分析微型群落结构和功能参数，判断水环境的质量状况或污染物质的毒性特征。检测结果有很强的生态学意义。PFU法是在群落水平上的,是较物种水平、种群水平更高的,因此它能提供较大的环境真实性。;最常用的方法是PFU（聚氨酯泡沫塑料块）法。 聚氨酯泡沫塑料块的孔径100-150um，微型生物可以进入其内，能收集到85%的种类，具有环境真实性。一定时间内，原生动物种群构成会达到平衡，而有害物会破坏这一平衡，比较试验组和对照组的群落结构和功能参数，即可评价水体质量与污染程度。;（二）试验方法与评价 把PFU分别浸入对照水体和调查水体，不同时段后，挤出液体，对原生动物鉴定和计数。 PFU中微型生物的结构与功能参数： 异养性指数（HI）=微型生物灰份量/叶绿素a量 原生动物群落多样性指数（d）=（S-1）/lnN (S为原生动物种类