香菇多糖的提取制备.pptx

香菇多糖的提取制备香菇多糖的性质 (1) 化学组成：香菇多糖是一种以β-D(1→3)葡聚糖残基为主链，侧链为(1→6)葡聚糖残基的葡聚糖。 (2) 性质：香菇多糖为灰白色粉末，大多为酸性多糖，溶于水、稀碱，尤其易溶于热水，不溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，其水溶液呈透明黏稠状。 香菇多糖是从香菇实体中提取的一种具有抗癌作用的高分子葡聚糖，其多糖部分以甘露糖为主，尚有葡萄糖、半乳糖、岩薄糖、木糖、阿拉伯糖等，肽链由天门冬氨酸、组氨酸、丝氨酸、谷氨酸等18种氨基酸组成。香菇多糖的提取一、实验原理 在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。 二、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。三、实验步骤1、材料：香菇2、试剂：试剂：活性炭、氯仿、无水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚、 浓硫酸、甘露糖、Sephadex G-100凝胶 3、设备和仪器：水浴锅、抽滤装置、离心机、分光光度计 4、操作过程（1）多糖的提取 取香菇10g，于组织捣碎机内粉碎，加20倍量的水，90℃水浴加热30min,抽滤，得滤液，加活性炭（1mg/ml），搅拌吸附1h，抽滤，得滤液，用氯仿萃取（3次）以除尽蛋白质，萃余液中加无水乙醇，使其乙醇最终浓度为80%，沉淀12h后，于离心机中离心4000r/min 30min，沉淀物分别用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤3次，即得香菇多糖提取物。（2）多糖提取 Sephadex G-100凝胶充分溶胀后装柱，用蒸馏水平衡48h。取香菇多糖提取物溶于蒸馏水中，离心去除不溶物，上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度5ml/20min，200nm波长紫外检测，收集主要峰分，冷冻干燥得白色香菇多糖，称重。 （3）香菇多糖分析检测 定性分析-----苯酚-硫酸法 苯酚-硫酸试剂：苯酚3g，浓硫酸5ml，溶于95ml无水乙醇中，喷后，110 ℃加入几分钟，糖显棕色 定量分析-----分光光度法 A.制备标准曲线 精密称取60 ℃干燥至恒重的甘露糖标准品0.1g，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，用移液管量取对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml分别置50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，在各精密吸取1ml置于比色管中，准确移取8%苯酚溶液1ml，快速加入浓硫酸5ml，置水浴中加热15min，取出冷却至室温，橘黄色溶液从小到大逐渐加深，将溶液于490nm波长的可见分光光度计处测定吸光值，绘制标准曲线 。B.样品多糖测定 精密称取香菇多糖10.0mg，加水溶解，定量移入100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。准确吸取2.00ml，按上述实验方法显色，测定吸光值，计算香菇多糖含量。 水浴加热