分析化学实验报告5. 醋膜电泳-2013-1022.docVIP

实验五 血清蛋白质醋酸纤维素膜电泳 [实验目的] 学习电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素膜电泳技术。 [实验原理] 定义：颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis，EP)。 电荷的来源与等电点概念： 带电颗粒可以是小的离子，也可是生物大分子，如蛋白质、核酸、病毒颗粒等。蛋白质分子由氨基酸组成，而氨基酸带有可解离的氨基(一NH3+)和羧基(一COO- )，是典型的两性电解质。一定的pH条件下就会解离而带电荷。 pI: 某一pH条件下，某种蛋白质分子净电荷为零时溶液的pH值。此时蛋白质溶解度最低，易沉淀。 当pH p I时, 氨基酸质子化呈现一NH3+ 和一COOH，故蛋白质带正电荷，在电场中泳向负极。 当pH p I时, 氨基酸去质子化，解离为一NH2 和一COO- ，故蛋白质带负电荷，在电场中泳向正极。 ②泳动度：不同带电颗粒在同一电场的运动速度不同，其泳动速度用泳动度表示： ∪: 称迁移率, 为cm2∕V??S; V: 为实际电压; Q: 为颗粒所带电荷; γ：为分子半径; η：为介质粘度。 ③影响因素： υ: 泳动速度; §: 电动势； E : 电场强度； D : 介电常数； C: 常数; η ：溶液的粘度 电场强度: 指电势梯度。电场强度越高，带电颗粒泳动越快。 常压电泳（100-500V）: 适于分离蛋白质等大