荧光定量PCR原理应用及StratageneMxP介绍.pptxVIP

内 容 提 纲荧光定量PCR原理及应用Stratagene Mx3000P荧光定量PCR仪第1页/共86页第一页，共87页。 常规核酸定量方法Southern 杂交Northern 杂交原位杂交传统 RT-PCR半定量 PCR存在的问题 灵敏度准确性特异性时间第2页/共86页第二页，共87页。 实时荧光定量PCR定义 利用荧光信号对PCR反应的过程进行实时监控目的 对起始模板进行定量 优点 灵敏, 重复性, 动态范围宽, 高通量原理 C(t)值与起始模板浓度的对数成反比第3页/共86页第三页，共87页。 什么是C(t)值C(t)Threshold（域值）第4页/共86页第四页，共87页。 C(t)值与起始模板的关系第5页/共86页第五页，共87页。 为什么要引入C(t)值CtEndpoints96 replicates of B7 gene molecular beacon第6页/共86页第六页，共87页。 1221利用电泳定量11,500 counts / 5200 counts = 2.2 fold difference第7页/共86页第七页，共87页。 实时荧光定量Ct 18 and Ct 22, 2^(4 Ct shift) = 16 fold difference第8页/共86页第八页，共87页。 第9页/共86页第九页，共87页。 如何定量标 准 曲 线 未 知