生物工程下游技术第八章-非线性色谱原理.pptxVIP

第八章 非线性色谱原理及其在蛋白质分离与纯化中的应用第一页，共三十三页。1、制备型液相色谱 preparative liquid chromatography 获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 半制备柱（内径8mm，长度15 ～ 30cm），一次制备量０.1～１mg；*第二页，共三十三页。2.制备HPLC概述—主要结构单元输液部:输液泵 shimadzu LC-6AD(适用于分析-半制备,再循环半制备)分离部:制备柱　内径20～50mm，柱长50cm。检测部:检测器 shimadzu SPD-M10Avp馏分部:馏分收集器 shimadzu FRC-10A第三页，共三十三页。制备HPLC概述—柱容量色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大 进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。第四页，共三十三页。制备HPLC概述—制备HPLC与 分析HPLＣ比较目的 填料流量流通池 联系 制备HPLC样品中特定成分的高纯度获取，大量、廉价的制备 20μ以上为佳 0.1-150ml/min 最大允许流速可为150mL/min在进行制备HPLC之前，常先进行分析HPLC实验，对分析方法进行优化、放大应用到制备HPLC中。 分析HPLC 定性分析：检测的灵敏