分子生物学技术的发展与应用 一代测序技术 分子生物学.pptx

一代测序技术主讲人:XXX 发展历程第二代测序使用最为广泛。以Roche公司的454技术，Illumina公司的Solexa，HiSeq技术为代表 一代测序技术01基本介绍02一代测序技术的方法 基本介绍01 基本介绍——第一代测序的发明人　　在1997年发明了利用DNA聚合酶和双脱氧链终止测定DNA核苷酸序列的方法。Fred Sanger及其同事 基本介绍——第一代测序的发明人第一代测序技术概念：传统的链终止法，化学降解法，以及在它们的基础上的各种DNA测序技术。 一代测序技术的方法02 一代测序技术的方法０１对DNA片段5’或3’末端进行放射性标记。０２采用特异性化学试剂修饰和裂解特定的碱基位点。Maxam-Gilbert化学降解测序法 实验步骤将标记完的样品，分成四份取待测DNA片段２．G+A反应 甲酸１．G反应，硫酸二甲酯４．C反应 在NaCl存在时，只有C与肼反应，得到一系列C末端的片段３．T+C反应 肼 一代测序技术的方法形成大小不一的DNA链电泳分离DNA链根据同位素标记自显影后读出序列 Maxam-Gilbert化学降解测序法的弊端化学降解测序法自建立以来没有很大的改进，目前仅在分析DNA和蛋白质相互作用中的DNA一级结构时等中才使用。受制于当时聚丙烯酰胺凝胶电泳的分辨能力 dNTP和ddNTP分子结构式Sanger双脱氧链终止法利用DNA聚合酶特性，使ddNTP