郝权_基于XFEL的结构生物学研究.pptxVIP

3/15/2023基于XFEL的结构生物学研究范海福中国科学院物理研究所郝权（第四次XFEL香山会议） 蛋白质晶体结构X射线衍射分析的几个重要环节jhkl模型构建结构精修|F(hkl)|相位推演晶体数据采集试样制备三维结构X光激光会有重要影响的几个环节 X光激光如何影响现有的X射线衍射分析● 相干性● 高强度● 短脉冲 Imaging Atomic Structure and Dynamics with Ultrafast X-ray Scattering K. J. Gaffney H. N. Chapman (2007). Science 316, 1444-1448.光源 实验装置 数据分析数据分析方法1952 D. Sayre1968 D.J. De Rosier A. Klug1971 R.W. Gerchberg W.O. Saxton1980 D. Sayre1982 R. H. T. Bates1999 J. Miao, C. Charalambous, J Kirz, D. Sayre2001 J. Miao, K. O. Hodgson D. Sayre 蛋白质单分子衍射相干成像（CDI)的相位推演模拟试验 J. Miao, K.O. Hodgson D. SayrePNAS, 98, 6641-6645 (2001)“An approach to three-dimensional structures of biomolecules by using single-molecule diffraction images”X-FEL: wavelength = 1.5?; per-pulse flux = 2×1012 photons; pulse length = 10 fsec;Data resolution: 2.5? 现有的光强和信噪比还不足以解单分子蛋白结构；但在2010年，LCLS完成了一个影响深远的衍射实验 HN Chapman et al. Nature 470, 73-77 (2011) doi:10.1038/nature09750Diffraction intensities and electron density of photosystem I. X射线的串行晶体学（SFX)是研究高分辨X射线CDI的中间产物；但是它具有在X射线衍射分析领域引发巨大变革的潜力。 X射线的串行晶体学有两大特点：一、先衍射后损伤 (Diffraction before Destruction)；二、用“粉晶”试样产生“单晶” 衍射。 A one-dimensional powder diffraction pattern seen using conventional methods (left) may potentially be analysed as three-dimensional single-crystal patterns using serial crystallography (right).Zhang at al. Volume 2 | Part 3 | May 2015 | Pages 322–326Hao, Volume 2 | Part 3 | May 2015 | Pages 307–308 3/15/2023串行晶体学的出现，为用X射线研究生物大分子的结构提供了许多新的可能：可以用微米甚至亚微米的多晶样品来测定蛋白质的结构，过去一般需要 用比这大几十倍的单晶体。可以在室温下进行衍射实验。过去样品一般都需要冷冻处理以 增加样品抗辐照的能力，但也增加了样品的镶嵌程度，甚至改变了蛋白质分子结构的细节。室温条件更便于操作，也更接近于 蛋白质的天然活动环境。能够对生物体内形成的蛋白质微晶进行分析研究，甚至不需要将这些微晶从生物细胞中取出来。还可以进行蛋白质结构的动态研究。 Crystal structure of rhodopsin bound to arrestin by femtosecond X-ray laser. Nature 523, 561 (2015).入选两院院士评选中国世界十大科技进展中科院上海药物所研究员徐华强带领的国际团队(28个单位)利用世界上最强X射线激光LCLS，成功解析视紫红质与阻遏蛋白复合物的晶体结构.APS data (7.7 ?) vs. LCLS data (3.3 ?).攻克了细胞信号传导领域的重大科学难题, 即GPCR如何激活另一条信号通