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(完整版)高效液相色谱仪使用注意事项-2016--第1页 岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用 HPLC 级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他 物质(使用0.45um 或更细的膜过滤) 。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时， 然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40 分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外 部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml 以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存 柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18 柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检 查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗； ⑧用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动 相的清洗。 11.要注意柱子的pH 值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新 的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱 性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条 件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件 进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： a 、最好使用流动相溶解样品。 b 、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c 、使用0.45µm 的过滤膜过滤除去微粒杂质。 流动相的配制 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要 求流动相具备以下的特点： a 、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时 间保留在柱中) 。 b 、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外) 。 c 、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果； 同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的 (完整版)高效液相色谱仪使用注意事项-2016--第1页 (完整版)高效液相色谱仪使用注意事项-2016--第2页 黏度) 。 d 、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV 检测器，最好使 用对紫外吸收较低的溶剂配制。 e 、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。 f 、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既 有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。 3、流动相流速的选择： 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流 速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳 流速。对内径为4.6mm 的色谱柱，流速一般选择1m ／min ，对于内径为4.0mm 柱，流速0.8m ／min 为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改 变流动相的洗涤强