第二章第二节基因克隆的载体.pptVIP

（2） 所用的试剂作用 ① 溶菌酶 能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的?-1，4糖苷键。 在碱性条件（pH8）下有活性。 ② 葡萄糖 增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力（震荡）的作用而降解。 第31页，共72页。 ③EDTA Mg2+、Ca 2+的螯合剂，可抑制DNA酶的活性，防止DNA被酶降解。 ④NaOH-SDS NaOH：强碱，提供pH12的碱性条件，使DNA双链变性。 SDS: 溶解细胞膜蛋白和细胞内蛋白，并结合成“蛋白—SDS”复合物，使蛋白质（包括DNA酶）变性沉淀。 第32页，共72页。 用冰醋酸将醋酸钠溶液的pH调到4.8。 用来中和NaOH变性液，使DNA复性。 高浓度的NaAc有利于变性的大分子（蛋白质、DNA、RNA等）沉淀。 用于沉淀DNA。 ⑥ 乙醇 DNA分子以水合状态“溶于”水里，乙醇能夺去DNA分子的水环境。 ⑤ NaAc-HAc缓冲液 第33页，共72页。 ⑦ RNase A 降解RNA渣滓。 以免提取后的DNA中含有小分子的RNA。 ⑧ TE缓冲液 DNA保存液。 由Tris-HCl和EDTA配制。 Tris-HCl不含金属离子（不同于磷酸缓冲液或硼酸缓冲液），有利于以后操作； EDTA抑制DNA酶，防止DNA被酶降解。 第34页，共72页。 蛋白变性剂，进一步抽提DNA溶液中的蛋白质，使蛋白质沉淀。 但苯酚会