基因工程体外重组.pptVIP

第一节 DNA的体外重组 　（2）与T载体直接连接 　Taq DNA聚合酶的特性：在DNA双链的3’端再加上一个多余的核苷酸（优先加A）,因此PCR产物两个3’端一般都有一个A 　　　T载体的两个3’端人为地各加一个T：利用Taq DNA聚合酶，当原料中只有dTTP时，被迫在平端载体上添加T！ Taq DNA聚合酶 第三十页，共四十五页。 第一节 DNA的体外重组 T载体图 第三十一页，共四十五页。 第一节 DNA的体外重组 A A dNTP T T dTTP Taq DNA聚合酶 载体 PCR产物 T A T A 　3. PCR产物的连接 　（2）与T载体直接连接 第三十二页，共四十五页。 生命科学学院 基因工程 第一页，共四十五页。 外源DNA 载体DNA 重组分子 扩增或表达 表达 连接 转化或转导 电穿孔或显微注射 原核细胞 真核细胞 受体细胞 ？ 1.基因文库 2.PCR 3.基因差异表达 1.克隆载体 2.表达载体 第二页，共四十五页。 第三页，共四十五页。 第一节 DNA的体外重组 限制酶 —分子剪刀 限制酶 —分子剪刀 连接酶 —分子胶水 重组DNA分子 粘性末端连接效率最高！ 第四页，共四十五页。 　 黏性末端　　　　 黏性末端 1、粘性末端的连接 第五页，共四十五页。 第六页，共四十五页。 第七页，共四十