SDSAGE电泳操作规范.docx

SDSAGE 电泳操作规 范 集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN] 聚丙烯酰氨凝胶电泳 一 简介 作用原理：聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它 有两种形式：非电泳(Native)及-聚丙烯酰胺凝胶(SDS- PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保 持完整状态，并依据的大小、蛋白质的形状及其所附带的而逐渐呈 梯度分开。而 SDS仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开 蛋白质。该技术最初由 shapiro 于 1967 年建立，他们发现在样品介 质和中加入离子和强 (SDS 即)后，蛋白质亚基的主要取决于亚基 分子量的大小(可以忽略电荷因素)。 二 作用 SDS 是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子 内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、 三级结 构。而强如，二硫苏糖醇(DTT)能使半胱氨酸残基间的断裂。在和凝 胶中加入和 SDS 后，分子被成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和 SDS 结合成蛋白- SDS，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的， 这样就消 除了不同分子间的电荷差异和结构差异。SDS一般采用的是不 连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的。 浓缩胶的作 用是有堆积作用，凝胶浓度较小， 孔径较大， 把较稀的样品加在浓 缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一