血红蛋白的提取和分离基础知识.docx

第 15 课时 血红蛋白得提取与分离 1、归纳蛋白质多样性得原因 (1)图甲说明:氨基酸得种类不同,构成得肽链不同。 (2)图乙说明:氨基酸得数目不同,构成得肽链不同、 (3)图丙说明:氨基酸得排列次序不同,构成得肽链不同。 (4)图丁说明:肽链得数目与空间结构不同,构成得蛋白质不同。 2。 血液包括血细胞与血浆,血细胞又分为红细胞、 白细胞与血小板,其中红细胞含有血红 蛋白,使红细胞呈现红色、 3、红细胞放到低渗溶液中,会吸收水分,体积膨胀直至涨破。 课堂导入 蛋白质就是生命活动不可缺少得物质, 随着基因组测序工作得完成,人们对蛋白质得研究 与应用工作进入了新得时代,这就需要获得纯度较高得蛋白质。 因此对蛋白质得分离就就 是生物学研究中经常要做得工作,下面我们就以血红蛋白得提取与分离来学习有关蛋白 质得一些基本技术。 探究点一 蛋白质分离技术 生物体内得蛋白质多种多样,按照科学得需要有时要把它们分开,分离蛋白质常使用得方 法就是凝胶色谱法与电泳法,都就是根据不同蛋白质分子得之间得差异来分离得。 1 。蛋白质特性得差异 (1)分子得形状与大小 (2)所带电荷得性质与多少 (3)溶解度 (4)吸附性质 (5)对其她分子得亲与力。 2 、分离得方法 (1)凝胶色谱法 Ⅰ。概念:凝胶色谱法,也称做分配色谱法,就是根据相对分子质量得大小分离蛋白质得有 效方法。 Ⅱ.凝胶:就是一些微小得多孔球体,大多数就是由多糖类化合物构成得, 内含许多贯穿通 道,具有多孔得凝胶又称为分子筛。 Ⅲ、凝胶色谱法分离蛋白质得原理(如图 A) 直径大小 直径大小 大于凝胶颗粒空隙 直径、被排阻在凝 胶颗粒得外面 洗脱 次序 先从凝胶柱 洗脱出来 运动方式 垂直向下移动 相对分 子质量 大 运动 速度 较快 运动 路程 较短 小于凝胶颗粒空 小于凝胶颗粒空隙 直径,可以进入凝胶 颗粒内部 垂直向下移动, 无规则扩散进入 凝胶颗粒 后从凝胶柱 洗脱出来 较慢 较长 小 Ⅳ、分离蛋白质得过程(如图 B) ①蛋白质混合物上柱 ②洗脱开始,相对分子质量较小得蛋白质扩散进入凝胶颗粒内 相对分子质量较大得蛋白 质则被排阻于凝胶颗粒之外 ③相对分子质量较小得蛋白质被滞留 相对分子质量较大得蛋白质向下移动 ④相对分子质量不同得蛋白质分子完全分开 ⑤相对分子质量较大得蛋白质行程较短, 已从层析柱中洗脱出来,相对分子质量较小得蛋 白质还在行进中。 (2)电泳 ①概念:电泳就是指带电粒子在电场得作用下发生迁移得过程。许多重要得生物大分子, 如多肽、核酸等都具有可解离得基团,在一定得 pH 下,这些基团会带上正电或负电。 在电 场得作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反得电极移动。 ②原理:在同一电场下, 由于各种分子带电性质得差异以及分子本身大小、 形状得不同 ,使 带电分子产生不同得迁移速度,从而实现样品中各种分子得分离、 ③常用方法 a、琼脂糖凝胶电泳:由于琼脂糖本身不带电荷,所以,各种分子在电场中得迁移速率因各种 分子带电性质得差异、分子大小与形状得不同而不同,从而得以分离。 b 。聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入SDS作用:使蛋白质发生完全变性,解聚成单条肽链 SDS 能与各种蛋白质结合形 成蛋白质—SDS 复合物,SDS 所带负电荷得量大大超过了蛋白质原有得电荷量, 因而掩盖 了不同种蛋白质间得电荷差别,使电泳迁移率完全取决于分子得大小。 (3)缓冲溶液 ①概念:在一定范围内,能够抵制外界得酸、 碱或稀释得影响,维持p H 基本不变得溶液叫 做缓冲溶液。 ②缓冲溶液得配制:缓冲溶液通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成、调节缓冲剂得 使用比例就可以制得在不同 pH 范围内使用得缓冲液、 小贴士 缓冲溶液常见得有三类 ( 1 )弱酸及其对应盐,如CH3 COOH—CH 3 COONa,H 2 CO3—NaHCO 3 。 (2)多元弱酸得酸式盐及其对应得次级盐,如:NaHCO3-N a 2 CO3,NaH 2PO 4-Na 2 HPO 4。 (3)弱碱及其对应盐,如 NH 3 ·H2O-NH4Cl。 归纳提炼 凝胶色谱法与电泳法 凝胶色谱法分离分子就是依据分子质量大小,利用凝胶色谱柱使大分子优先洗脱出来, 而 小分子后分离出来。 电泳法分离分子则就是依据各种分子带电性质得差异, 以及分子本身 得大小、形状不同,使带电分子产生不同得