菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作.ppt

第四节 微生物分类鉴定的方法菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作。不论鉴定对象属哪一类，其工作步骤都离不开以下三步： ①获得该微生物的纯种培养物；②测定一系例必要的鉴定指标；③查找权威性的鉴定手册。 通常把鉴定微生物的技术分成四个不同水平：①细胞的形态和习性水平，例如用经典的研究方法，观察细胞的形态特征、运动性、酶反应、营养要求和生长条件等。②细胞组分水平，包括细胞组成成分例如细胞壁成分，细胞氨基酸库，脂类，醌类，光合色素等的分析，所用的技术除常规实验室技术外，还使用红外光谱、气相色谱和质谱分析等新技术。③蛋白质水平，包括氨基酸序列分析、凝胶电泳和血清学反应等若干现代技术。④基因或DNA水平，包括核酸分子杂交（DNA与DNA或DNA与RNA），G＋Cmol%值的测定，遗传信息的转化和转导，16S rRNA（核糖体RNA）寡核苷酸组分分析，以及DNA或RNA的核苷酸顺序分析等。 在微生物分类学发展的早期，主要的分类鉴定指标尚停留在细胞的形态和习性水平上，这类方法可称作经典的分类鉴定方法；从本世纪60年代起，后三个水平的分类鉴定的理论和技术即化学分类学开始发展，度为探索微生物的自然分类系统打下了坚实的基础，这些方法再加上数值分类法，可称为现代的分类鉴定方法。 一、经典分类鉴定方法所谓经典的分类鉴定方法，是相对于现代的分类鉴定方法而言的，通常指长期以来在常规鉴定中普遍采用的一些形态、生理、生化、生态、生活史和血清学反应等指标. 群体：菌落形态，在半固体或液体培养基中的生长状态等形态个体：细胞形态，染色反应，各种特殊构造等vvvvv营养要求：能源，碳源，氮源，生长因子等生理、生化反应 酶；产酶种类和反应物性等代谢产物：种类，产量，显色反应等经典指标 生态特性：生长温度，对氧的需要，宿主种类等生活史特点v血清学反应vv噬菌体的敏感性其它v 经典分类法经典分类法是一百多年来进行微生物分类的传统方法。其特点是人为地选择几种形态生理生化特征进行分类，并在分类中将表型特征分为主、次。一般在科以上分类单位以形态特征、科以下分类单位以形态结合生理生化特征加以区分。 v A. 能在 60 o C 以上生长v B. 细胞大，宽度 1.3~1.8mm ………………… 1. 热微菌属 ( Thermomicrobium )v B. 细胞小，宽度 0.4~0.8mmv C. 能以葡萄糖为碳源生长v D. 能在 pH4.5 生长 …………………………… 2. 热酸菌属 ( Acidothermus )v DD. 不能在 pH4.5 生长 …………………………………… 3. 栖热菌属 ( Thermus )v CC. 不能以葡萄糖为唯一碳源 ……………… 4. 栖热嗜油菌属 ( 栖热嗜狮菌属Thermoleophilum )v AA. 不能在 60 o C 以上生长 二、现代分类鉴定方法v 　近年来，随着分子生物学的发展和各项新技术的广泛应用，促使微生物分类鉴定工作有了飞速发展。对微生物鉴定工作来说，已从经典的表型特征的鉴定深入到现代的遗传学特性的鉴定、细胞化学组分的精确分析以及利用电子计算机进行数值分类研究等新的层次上。v （一）微生物遗传型的鉴定v DNA是除少数RNA病毒以外的一切微生物的遗传信息载体。每一种微生物均有其自己特有的、稳定的DNA成分和结构，不同微生物间DNA成分和结构的差异程度代表着它们间新缘关系的远近。因此，测定每种微生物DNA的若干重要数据，是微生物鉴定中极其重要的指标： 1. DNA的碱基组成(G+Cmol%)v 每一个微生物种的 DNA 中 GC mol% 的数值是恒定的，不会随着环境条件、培养条件等的变化而变化，而且在同一个属不同种之间， DNA 中 GCmol% 的数值不会差异太大，可以某个数值为中心成簇分布，显示同属微生物种的 GC mol% 范围。 DNA 中 GC mol% 分析主要用于区分细菌的属和种，因为细菌 DNA 中 GC 含量的变化范围一般在 25 ％～ 75 ％；而放线菌DNA 中的 GC 比例范围非常窄 (37 ％～ 51%) 。一般认为任何两种微生物在 GC 含量上的差别超过了 10 ％，这两种微生物就肯定不是同一个种。因此可利用 G+C mol ％来鉴别各种微生物种属间的亲缘关系及其远近程度。值得注意的是，亲缘关系相近的菌，其 G+C mol ％含量相同或者近似，但 G+C mol ％相同或近似的细菌，其亲缘关系并不一定相似，这是因为这一数据还不能反映出碱基对的排列序列，而且如放线菌的 DNA 的 GC mol% 在 37 ～ 51 之间，企图在这么小的范围内区分放线菌的几十个属显然是不现实的。要比较两种细菌的 DNA 碱基对排列序列是否相同，以及相同的程度如何，就需做核酸杂交试验。 1