5.3血红蛋白的提取及分离(1).pptVIP

3. 溶血性输血反应 患者接受不相容红细胞或对其自身红细胞有同种抗体的献血者血浆，使献血者红细胞或自身红细胞在体内发生异常破坏，而引起的不良反应，称为溶血性输血反应。 溶血反应的严重度取决于：输入不相容红细胞量，血浆中抗体浓度和激活补体的能力、补体浓度、抗体特性、抗原特性、单核巨噬细胞系统的功能和输血速度等。 溶血反应按其发病缓急分为： （1）急性溶血性输血反应 于输血后24小时内发生，多于输血后立即发生。 （2）迟发性溶血性输血反应 主要是对先前存在致敏抗原，产生回忆应答的结果。多半在输血后3~7天发生溶血反应。 3. 溶血性输血反应 3.急性溶血性输血反应 1）发生原因 ABO血型不合（最常见、最严重）、 A2亚型不合 输注不相溶性血浆 献血者之间血型不合 RH血型不合 其他稀有血型不合 一般血清学方法未能发现的血型抗体 （3.1）急性溶血性输血反应 3）症状与体征 寒颤、发热、心悸、头涨、面红、腰背痛、恶心、呕吐、腹痛、呼吸困难、烦躁等症状。血红蛋白尿，黄疸等休克、DIC、急性肾功能衰竭。 在处于全麻状态下，出现不能解释的手术区严重出血及低血压可为溶血反应的唯一表现。 个别患者因免疫功能低下，血中抗体效价低，误输入少量异型血而不出现典型溶血反应症状。有时症状不明显而被忽视。 （3.1）急性溶血性输血反应 4）诊断 根据症状、体征判断分折； 实验室检查：溶血实验、血生化、血尿常规、肾功能。 （3.1）急性溶血性输血反应 5）.发生后的处理 立即停止输血，保留余血；采集患者血样重做鉴定及交叉配血； 保护肾功能，呋塞米(40-60mg),必要时q4h，静滴碳酸氢钠碱化尿液，促进血红蛋白结晶溶解，直到血红蛋白尿基本消失，防止肾小管阻塞; 维持水电解质平衡、防止DIC; 如果病情严重应做血浆置换。 * 课题3 : 血红蛋白的提取和分离 PCR反应需提供的条件 1:缓冲液中进行 2:DNA模板 3:分别与两条模板链相结合的两种引物 4:四种脱氧核苷酸 5：耐热的DNA聚合酶 6：同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行 5? 引物1 5? 引物2 第二次复制 第一次复制 5? 5? 5? 5? 5? 5? 模板DNA 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 25～30 次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。 体内DNA复制与PCR的技术区别： 体内复制 PCR技术 解旋 引物 一般用DNA片段 DNA聚合酶 细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温） TaqDNA聚合酶 复制特点 半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。 半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。 复制的方向 子链的5’端向 3’端延伸 子链的5’端向 3’端延伸 在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开 加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶 一小段RNA 血红蛋白介绍： 血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白是由574个氨基酸脱水缩合而成的含有四条肽链的蛋白质（两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素）。氧气结合在铁原子上，被血液运输。因含血红素血红蛋白呈红色。血红蛋白占红细胞干重97%、总重的35%。平均每克血红蛋白可结合1.34ml的氧气，是血浆溶氧量的70倍。一个哺乳动物血红蛋白分子可以结合最多四个氧分子。 血红蛋白也参与其他气体的转运：它能携带机体的部分二氧化碳（大约10%）。 回忆：蛋白质基本单位？合成场所？蛋白质的分子结构具有多样性的直接原因？根本原因？蛋白质的功能？ 思考： 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 主要功能 实例 组成细胞的结构成分 细胞膜中的蛋白质，染色体中的蛋白质等 运输功能 细胞膜上的载体蛋白、运输氧气的血红蛋白等 催化功能 胃蛋白酶、纤维素酶等 调节功能 生长激素、胰岛素等激素 免疫功能 B 淋巴细胞受到抗原刺激后产生的抗体 一、基础知识： ㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖） 2、概念：根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法 3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，