人教教学动物细胞融合与单克隆抗体的制备.pptxVIP

第1页/共30页人教教学动物细胞融合与单克隆抗体的制备第2页/共30页一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合①.细胞融合的概念②.诱导动物细胞融合的方法③.意义并用笔画出来第3页/共30页2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程第4页/共30页思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能 还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能第5页/共30页1、动物细胞融合过程不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂第6页/共30页植物细胞A植物细胞B 原生质体A原生质体B动物细胞B动物细胞A物理法杂种细胞生物法：灭活的病毒化学法常用方法愈伤组织杂种细胞杂种植株动物细胞融合去壁原生质体融合植物组织培养植物体细胞杂交第7页/共30页3、过程灭活的病毒不同DNA的两个细胞杂交细胞PEG等细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核细胞膜的流动性4、原理5、最有价值的应用制备单克隆抗体第8页/共30页植物、动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞膜的流动性、原理细胞膜的流动性植物细胞全能性去除细胞壁后诱使细胞分散后诱细胞融合的方法导原生质体融合导细胞融合物理（离心、振动、电刺激）物理、化学方法诱导方法（同左）灭活的病毒化学（聚乙二醇）用途获得杂种植株主要用于制备单克隆抗体第9页/共30页 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A．离心B．灭活的病毒C．电刺激D．振动 2.动物细胞融合的目的中最重要的是A．克服远源杂交不亲和B．制备单克隆抗体C．培育新物种D．生产杂种细胞第10页/共30页思考题请同学们阅读课本P527、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体第11页/共30页二、单克隆抗体提问？1.抗体是由何种细胞产生的？２、一个Ｂ淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？３、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？浆细胞 每个Ｂ淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个Ｂ淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。一种第12页/共30页浆细胞刺激抗原不纯 抗原 动物体 抗体产量低、反应不够灵敏特异性差、纯度低；４. 简述获得抗体的传统途径？抗体不纯５、这种方法获得的抗体有什么缺陷？6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?不能怎样解决这个问题？第13页/共30页二、单克隆抗体设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂交细胞思考：第14页/共30页 为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。第15页/共30页2、单克隆抗体的制备过程注射特定抗原蛋白培养液中细胞有几种类型？ （只考虑两两融合）融合细胞几种类型？培养骨髓瘤细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞--- B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞3种骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞B淋巴细胞--- B淋巴细胞B淋巴细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。在具有筛选作用的培养基上培养杂交瘤细胞有何特点？专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体特异性强，灵敏度高第16页/共30页2.制备过程：注射抗原的目的是什么诱导其融合的方法有哪些？融合后培养液中有几种细胞两次筛选的原因大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法第17页/共30页课堂小结小鼠腹腔内增殖2、单克隆抗体制备过程骨髓瘤细胞诱导融合B淋巴细胞B淋巴细胞骨髓瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）B-瘤细胞B-B细胞瘤-瘤细胞产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养克隆化培养单克隆抗体抗体检测单克隆抗体制备过程中应