药敏实验—药物敏感实验—细菌的药敏试验纸片扩散法（兽医实验室诊断技术）.pptx

细菌的药敏试验——纸片扩散法 一 细菌的药敏试验---纸片扩散法 （一）器材与试剂 接种环、洒精灯、试管架、玻璃笔、恒温培养箱、镊子、购买的各种抗生素药敏纸片、普通琼脂平板、无菌的生理盐水，无菌棉拭子，大肠杆菌、葡萄球菌的培养物或临床分离的纯菌株等。 （二）操作步骤 1．在无菌超净台中，用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌纯培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式;用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的 1/2。然后，找到第二点划线至平皿的 1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。(另:可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面，要求一定涂布均匀致密。 细菌的药敏试验——纸片扩散法 二 2．涂布后的平板培养基在室温静置 3～5 分钟， 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停冷却，取药敏纸片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上;一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片(外周一般可贴 4 片)，每种药敏纸片的间距大于 2cm,，避免抑菌圈重叠，每种药敏片的名称要记住。每换一种药敏纸片镊子都要于酒精灯火焰灭菌，药敏纸片贴上后不得再移动位置。 3．将平皿培养基倒置于 37℃温箱中培养 18