分子生物学实验五.pptxVIP

分子生物学实验五;电泳概念; 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。 迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗粒表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。;影响琼脂糖电泳迁移的因素; 凝胶中的琼脂糖含量[%（W/V）] ; 对于未进行酶切的质粒来说，常会出现两条电泳带，一条是（松弛）螺旋状质粒DNA带，另一条是超螺旋状质粒DNA的带，以超螺旋状质粒DNA居多，移动速度也最快。有时还会出现三条带，其中一条是因为有一些质粒DNA在提取过程中遭到损伤而线性化，其移动速度介于螺旋状和超螺旋状质粒DNA之间，所以该条电泳带也位于上述两种带之间。如果提取的质粒很好时，这条带会很弱，有时看不到。;缓冲液;电泳仪，电泳槽，紫外透射仪，凝胶成像仪，一次性塑料手套等 ;1) DNA的准备;2) 琼脂糖凝胶的制备 琼脂糖凝胶液的制备：称取0.7g琼脂糖，置于三角瓶中。; 加入100ml TBE或TAE工作液，瓶口倒扣一个小烧杯等，将该三角瓶置于微波炉加直至琼脂溶解。;3）胶板的制备 取有机玻璃内槽，洗净、晾干；取纸胶条(宽约1cm)，将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，放好梳子。 ; 将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液，小心地倒在有机玻璃内槽上，控制灌胶速度和量，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃