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分子遗传学的学习教案;2;3; 信使的发现;同年Goldstein和Plaut 同位素标记变形虫RNA前体： 发现标记的RNA在核内 标记追踪实验：经过一段时间发现被标记的RNA在细胞质中 此表明什么？;1956年E. Volkin和 L.Astrachan： 用同位素脉冲一追踪标记： 表明T2噬菌体新合成的RNA的碱基比和T2的DNA碱基比相似，而和细菌的碱基比不同。由于T2感染细菌时注入的是DNA，而在细胞里合成的是RNA 此表明什么？;最令人信服的证据是Hall.B.D和Spiegeman. S DNA-RNA的杂交实验： 将T2噬菌体感染E.coli后产生的RNA分离出来，分别与T2和E.coli的DNA进行分子杂交，结果这种RNA只能和T2的DNA形成“ 杂种”链，而不能和E.coli的DNA进行杂交。;Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2）其分子平均不小于5?105bp，足以携带一个基因的遗传信息； （3）它们至少是暂时连在核糖体上； （4）其碱基组成反映了DNA的序列； （5）它们能高速更新。 Jacob和Monod将它定名为: 信使RNA（Messenger RNA）或mRNA ; 一、RNA合成的基本特点; 二、RNA合成和DNA复制的区别; 三、有义链和无义链;第12页/共91页;13;用实验证实mRNA的合成总是延着5′-3′方向进行的： E.coli在0?C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37?C每秒就可加上40个核苷酸; 利用这个差别以14C来标记U,在0?C培养E.coli， 提取这种正在伸长的mRNA分子 发现14C标记首先出现在伸长的3′端 因此可以证明合成是延着5′-3′方向进行的 ;● 某一基因只以一条单链DNA 为模板进行转录（不对称转录） ;● 原核生物中的转录单位多为多顺反子，有操纵子结构； ;研究转录涉及到两个方面： 其一是RNA合成的酶学反应； 其二是RNA合成的起始、延伸、终止和释放各阶段；; 大肠杆菌的RNA聚合酶是目前了解最详细的RNA聚合酶 在一个大肠杆菌细胞中，大约有7000个RNA聚合酶分子，其中有2000－5000个酶分子在参与RNA的合成 RNA聚合酶合成RNA的速度：37℃ 约40个核苷酸/秒 RNA pol 和DNA pol有两点不同： （1）RNA pol 没有任何校对功能； （2）在不需要引物的前提下能起始合成新的RNA链。 ;大肠杆菌RNA聚合酶;E. coli RNA Polymerase;21; ? 因子（蛋白）包含一个螺旋-转角-螺旋结构，可以嵌入 DNA 大沟，并通过氢键与 DNA 紧密结合。;23; 枯草杆菌至少有 10 种 ? 因子： ?A，B，C，D，H，L：识别营养生长期表达的基因的启动子 ?E，F，G，K：识别孢子形成期表达的基因的启动子;25;26;27;28;;第30页/共91页; RNA pol 执行的功能; 二、转录的起始与延伸;第33页/共91页;34; CAP-cAMP binding site ;Site II + CAP-cAMP 复合体 促使Sextama Box 附近GC岛区的双螺旋结构稳定性降低， Pribnow Box 的解链温度降低，利于转录启动 ;37;(1)结构典型,都含识别（R，即-35区),结合（B，即-10 区)和起始（I，+1）位点; (2)序列保守;如-35和-10序列结构； (3)位置和距离都比较恒定； (4)直接和多聚酶相结合； (5)位于基因的上游； (6)决定转录的启动和方向； (7)常和邻近基因共同组成操纵子（operon），这也是原 核生物的特性。; 典型启动子的结构;40; -10区（Pribnow 框 ）;-10序列的碱基组成对转录的效率影响很大，发生此区域的某些突变会导致如下结果：;转录开始时模板上的第一个碱基 为转录起始位点； 在原核生物中90%以上为A或G； 位置固定，常见序列是CAT。 ;44;* -35和-10都是大致位点;46;47;48;49;50;第51页/共91页;第52页/共91页;第53页/共91页;（三）RNA的合成延伸;转录过程 ;第56页/共91页; 三、转录的终止; 自发终止 在 RNA 链中需要两种序列元件： 位于 RNA 3? 末端的富含 U 的序列，即U串； 靠近 RNA 3? 末端的自互补序列（即回文序列），可形成茎-环结构。; 强终止子的结构; N