分子植物病理学.pptxVIP

分子植物病理学第1页/共198页 3、主要研究方法（main strategy） ◆ 从“里”到“外”：以研究寄主和病原物的基因为主要对象，阐明寄主－病原物相互作用的有关基因的结构、表达、调控及其产物功能。　 ◆ 方 法导向：先以分子克隆的方法鉴定与致病性有关的基因，然后根据该基因产物及其对生物表型的影响，确定该基因的类型和作用。　 ◆ 在分子（DNA）水平上通过互补分析和缺失研究，从个体到群体分析有关基因的作用和功能表现的调节。第2页/共198页 4、分子植物病理学的发展（history） 分子植物病理学是植物病理学中最年轻的分支，是在遗传学、细胞生物学、分子生物学、生物化学和生物物理学等现代学科发展和影响下逐渐形成的。然而，由于各种病原物的分类地位及其所从属的学科不同，因此，在各种植物病害的研究中，运用分子植物病理学观点和方法对其进行研究的水平是不平衡的。★　植物病毒病害的分子生物学研究　　1935，W. M. Stanley 成功分离出TMV结晶，并证明结晶的大部分组成是protein. 1937,E. C. Borden ﹠N. w. Pirie 报道了TMV的化学组成，提出该病毒由95％protein 和5％RNA组成．第3页/共198页 　　1955～1956，H. Frankel-Conrat 对TMV的蛋白质和核酸进行了重组研究，为证明核酸作为一种遗传物质的作用提出了令人信服的证据．　　可被TMV抗体纯化不能被HR抗体纯化侵染植物RNA供体病毒的特征分离出的病毒颗粒能被HR抗体钝化杂合病毒TMV CPHR RNA 1958,Gierer et al,用亚硝酸诱变获得TMV突变株,使坏死病斑从0.2%增加到15%,进一步说明病毒RNA的突变与致病功能的关系.第4页/共198页 ★　植物细菌病害的分子生物学研究 植物病原细菌中欧氏杆菌归属于肠杆菌科，这类病原菌的分子遗传研究在20世纪70年代初才开始，较肺炎双球菌的分子遗传学研究迟了近40年，较DNA双螺旋的发现晚了将近20年。 20世纪50～70年代是植物病原细菌基因操作技术积累的时期。 1953～1956，D.T. Klein ﹠R. M. Klein 发现根癌土壤杆菌的基因转化与致病性有关的现象。 1957， R.R.Corey﹠M.P.Starr 发现了菜豆黄单胞的转化作用与其对链霉素抗性和菌落形态变化之间的关系。 1966，日本学者完成了水稻白叶枯病菌的转化研究。第5页/共198页 农杆菌（Agrobacterium tumefaciens） 1944, 发现农杆菌侵染的植物组织可以在不加激素的培养基上生长。 1970，G.Morel et al.发现农杆菌致病菌有两种类型，其区别在于对两种不常见Arg衍生物章鱼碱（octopine）和胭脂碱（nopaline）的代谢不同。 1973,J.A.Lippincoot证明，无致病力菌株丧失对上述两种Arg衍生物的利用能力，因此，农杆菌有3种类型。 type toxic octopine nopaline octopine opaline A + + － + － B + － + － + C － － － － － 细菌利用 肿瘤组织合成第6页/共198页 1974～1978，农杆菌菌株的遗传转化研究。其中，1977， M.D.Chilton证明农杆菌的Ti质粒上只有一小段DNA与肿瘤诱发有关系，而且可以从细菌转移到植物细胞；1978，J.Schell 首次以Ti为载体把带有抗生素抗性基因的转座子Tn7转移到植物细胞中去，开创了以Ti质粒为载体转移外源DNA进入植物的植物基因工程研究日益兴旺，同时对Ti质粒的精细分析和与寄主植物互作的研究成为分子植物病理学研究热点.欧氏杆菌(Erwinia spp) 欧氏杆菌与大肠杆菌相近,同时也是重要植物病原细菌,因此开始分子遗传学研究较早。20世纪70年代,M.P.Starr实验室进行了欧氏杆菌Hfr菌株的结合遗传学