基因工程诱变.pptVIP

第二十八页，共四十一页，2022年，8月28日 （三）转化子诱变 （transformer site-directed mutagenesis） 转化子诱变也使用了2个寡核苷酸引物，除了突变引物外，还使用了1个用来剔除单一酶切位点的引物。因此该方法也称酶切位点剔除法。将待突变的DNA片段装载到克隆载体上，该载体上必须存在1个单一酶切位点。当这两个引物同时指导DNA合成时，突变的DNA链将不再含有该单一酶切位点，而模板DNA在该位置能被切割。通过转化大肠杆菌，线性化的模板DNA不能复制，只有突变保持环状，可以获得转化子。 第二十九页，共四十一页，2022年，8月28日 第一页，共四十一页，2022年，8月28日 定向进化的原理 第二页，共四十一页，2022年，8月28日 第一节 随机诱变 体外随机诱变：指随机地在克隆化DNA中引入碱基置换突变。 特点：不需要有序列针对性的合理设计，引入突变的位置随机； 结果：在目的DNA片段中引入大量的序列多样性； 方法：错误掺入诱变、增变菌株诱变、盒式诱变、化学诱变； 用途：诱变基因的编码区，改变氨基酸序列，从而改造蛋白质的性质或活性，得到符合需要的蛋白质。 定向进化：对于某些实验目的，一次突变很难获得满意的结果，通常采用反复多次诱变和循环，其目的是获得满足人们需要的性能改良的蛋白质，又称为试管进化。 第三页，共四十一页，2022年，8月28