蛋白质结构解析技术二.pptVIP

第四节 质谱技术 简单介绍概念和原理，在蛋白质组学中再详细介绍 现在是62页\一共有125页\编辑于星期五 一、概述 现在是63页\一共有125页\编辑于星期五 现在是64页\一共有125页\编辑于星期五 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 1.气体扩散 2.直接进样 3.气相色谱 1.电子轰击 2.化学电离 3.场致电离 4.激光 1.单聚焦 2.双聚焦 3.飞行时间 4.四极杆 质谱仪需要在高真空下工作：离子源（10-3 ?10 -5 Pa ） 质量分析器（10 -6 Pa ） 1．大量氧会烧坏离子源的灯丝； 2．用作加速离子的几千伏高压会引起放电； 3．引起额外的离子－分子反应，改变裂解模型，谱图复杂化。 一、质谱分析原理 现在是65页\一共有125页\编辑于星期五 电离室原理与结构 仪器原理图 原理与结构 现在是66页\一共有125页\编辑于星期五 质谱仪分析原理 现在是67页\一共有125页\编辑于星期五 现在是68页\一共有125页\编辑于星期五 现在是69页\一共有125页\编辑于星期五 现在是70页\一共有125页\编辑于星期五 现在是71页\一共有125页\编辑于星期五 现在是72页\一共有125页\编辑于星期五 现在是73页\一共有125页\编辑于星期五 现在是74页\一共有125页\编辑于星期五 现在是75页\一共有125页\编辑于星期五 现在是76页\一共有125页\编辑于星期五 现在是77页\一共有125页\编辑于星期五 现在是78页\一共有125页\编辑于星期五 现在是79页\一共有125页\编辑于星期五 现在是80页\一共有125页\编辑于星期五 现在是81页\一共有125页\编辑于星期五 现在是82页\一共有125页\编辑于星期五 现在是83页\一共有125页\编辑于星期五 现在是84页\一共有125页\编辑于星期五 现在是85页\一共有125页\编辑于星期五 现在是86页\一共有125页\编辑于星期五 现在是87页\一共有125页\编辑于星期五 现在是88页\一共有125页\编辑于星期五 现在是89页\一共有125页\编辑于星期五 现在是90页\一共有125页\编辑于星期五 （2） 化学位移表示方法 从吸收频率来看，“化学位移”的单位为“Hz” 60 MHz仪器，质子共振频率变化约在1000 Hz 100 MHz仪器，质子共振频率的变化约在1700 Hz H0不同，共振产生的频率不同，无法比较。 要求测定几个Hz的精度，测定绝对值非常困难 因此，采用相对值的方法表示 “化学位移” 现在是30页\一共有125页\编辑于星期五 （A）1970年 IUPAC（国际纯粹与应用化学协会）建议： 化学位移用位移常数（δ）来表示，单位：ppm 扫频： δ =（ν样品- ν标准）×106/ ν标准 = （ν样品- ν标准）×106/ ν仪器 扫场： δ =（H样品- H标准）×106/ H标准 = （H样品- H标准）×106/ H仪器 仪器：数十MHz到数百MHZ； 测定差值：几十 Hz 至 几百 Hz 比值：百万分之几，所以×106 ，单位：ppm （2） 化学位移表示方法 现在是31页\一共有125页\编辑于星期五 （2）化学位移的表示方法 （B) 位移的标准 　　没有完全裸露的氢核， 没有绝对的标准。 相对标准： 四甲基硅烷　Si(CH3)4 ，简称：TMS，（内标或外标） 位移常数 ?TMS=0 （ 1970年 IUPAC 规定） (C) 为什么用TMS作为基准? a. 12个氢处于完全相同的化学环境，只产生一个尖峰； b. 屏蔽强烈，位移最大。与有机化合物中的质子峰不重迭； c. 化学惰性；易溶于有机溶剂；沸点低，易回收。 现在是32页\一共有125页\编辑于星期五 （2）位移的表示方法 与裸露的氢核相比，TMS的化学位移最大，但规定 ?TMS=0，其它种类氢核的位移为负值，负号不加（省略）。 ? = [( ?样 - ?TMS)/ ?TMS ]?106 (ppm) ?小，屏蔽作用强，共振需要的磁场强度大，在高场出现，图右侧； ?大，屏蔽弱，共振需要的磁场强度小，在低场出现，图左侧； （D）表示规则 现在是33页\一共有125页\编辑于星期五 2、影响化学位移的因素（4个因素） （1）电负性—去屏蔽效应 与质子相连元素的电负性越强，吸电子作用越强，价电子偏离质子，屏