转基因和基因敲除技术.ppt

转基因与敲除技术;转基因技术;定义;转基因技术基本原理;重组DNA技术操作的主要步骤;(插入失活法) 抗药性标记选择;原位杂交;Southern印迹;常用的植物转基因方法;常用的动物转基因技术;转基因技术发展情况;植物：抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质（富含赖氨酸的玉米） 动物：提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器 微生物：疫苗 基因治疗，生物治疗，基因诊断，疾病基因的发现与克隆、遗传病的预防 ;基因敲除(knock-out);定义;利用基因同源重组进行基因敲除;Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤 ： ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 ③通过分支移动产生异源双链DNA ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为： ; 内切酶 (recBCD);Holiday中间体;RNA干扰引起的基因敲除;利用随机插入突变进行基因敲除;研究现状;文献讲解;位于10号染色体上，包括10个外显子，其中启动子外显子2上;构建基因载体;相差镜检法;DAc8-p53-1 ES cell;产24只幼鼠，其中 10只公鼠和6只母 鼠被着色，说明存 在DAc8-p53-1。;PCR genotyping results showed that this germ line animal did not inherit the gene-targeted p53 allele;Failure of mouse ES cells;over 65% of the cells were polyploid（多倍体）;Around 10% of the cells formed round and compact colonies;inheritance the gene-targeted p53 allele;9/12;summary;THANKS!转基因与敲除技术;转基因技术;定义;转基因技术基本原理;重组DNA技术操作的主要步骤;(插入失活法) 抗药性标记选择;原位杂交;Southern印迹;常用的植物转基因方法;常用的动物转基因技术;转基因技术发展情况;植物：抗虫、抗病、抗除草剂植物培育、改良作物品质（富含赖氨酸的玉米） 动物：提高生长速度、生产药物蛋白、器官移植、乳腺生物反应器 微生物：疫苗 基因治疗，生物治疗，基因诊断，疾病基因的发现与克隆、遗传病的预防 ;基因敲除(knock-out);定义;利用基因同源重组进行基因敲除;Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤 ： ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 ③通过分支移动产生异源双链DNA ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为： ; 内切酶 (recBCD);Holiday中间体;RNA干扰引起的基因敲除;利用随机插入突变进行基因敲除;研究现状;文献讲解;位于10号染色体上，包括10个外显子，其中启动子外显子2上;构建基因载体;相差镜检法;DAc8-p53-1 ES cell;产24只幼鼠，其中 10只公鼠和6只母 鼠被着色，说明存 在DAc8-p53-1。;PCR genotyping results showed that this germ line animal did not inherit the gene-targeted p53 allele;Failure of mouse ES cells;over 65% of the cells were polyploid（多倍体）;Around 10% of the cells formed round and compact colonies;inheritance the gene-targeted p53 allele;9/12;summary;THANKS!