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反相色谱法中缓冲盐的选择-现代液相色谱技术导论读书笔记（二） 反相色谱法在色谱中是最广泛的应用，分离中性样品和离子样品的首选。中性样品：样品不带正电荷或者负电荷的分钟哦，通常是由于样品酸或碱被离子化的结果。虽然一个中性分子意味着该样品没有酸性或碱性分子，然而实际情况并非如此。依赖于流动相的pH，样品中酸或碱可能在很大程度上（比如90%以上）体现出中性的（非离子化）形式，在这种情况下，色谱图和非离子化的化合物非常类似。离子化样品：酸、碱、酸碱混合物（含或不含中性化合物）。色谱柱常使用C18或C8,流动相常使用水和有机相的混合溶液。常用的有机溶剂为CAN（首选），甲醇，异丙醇，四氢呋喃等。水相通常是缓冲盐。 （一）流动相pH的确定在RPC中，色谱柱是非极性的，流动相是极性的。极性很强的分子和极性的流动相之间作用更强烈，在色谱柱行保留较弱，首先离开色谱柱。同样的，极性较弱的分子与非极性的色谱柱左右，后离开色谱柱。因此大小接近的类似分子在RPC的洗脱大致随着他们的极性减低而减慢。RPC的保留很大程度上是溶质分子和流动相或者色谱柱相互作用的结果。增加B%（有机相），会使流动相极性减小，增加溶质和溶剂的相互作用，溶质分子的保留都减少。提高温度同样减少溶质的保留。色谱柱疏水性增加同样会减少溶质分子的保留，如同一样品在氰基柱上比C18柱较快出峰（氰基柱的极性比c18强）。 较高的极性会缩短样品在R