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- 2023-05-05 发布于上海
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其他重要工具酶;第二节 其它重要的工具酶;DNA 聚合酶是催化以 DNA 或 RNA 为模板合成 DNA 的一类酶的总称。
经常使用的 DNA 聚合酶有大肠杆菌 DNA 聚合酶 I(全酶)、Klenow 酶、T4 DNA 聚合酶、T7 DNA 聚合酶、耐高温的 Taq DNA 聚合酶以及反转录酶等。
这些 DNA 聚合酶的共同特点是:它们都能够把脱氧核糖核苷酸(dNTP,包括 dATP、 dTTP、 dCTP 和 dGTP)连续的加到双链 DNA 引物链的 3-羟基末端上,催化核苷酸的聚合,形成新的 DNA 链。;DNA 聚合酶 I 具有三种活性,即 5?→3?聚合活性、5?→3?外切活性和 3‘→5’外切活性。
DNA 聚合酶 I 要发挥作用需满足以下三个条件。
① 底物和激活剂:DNA 聚合酶 I 催化聚合反应需要四种 dNTP(dATP、dCTP、dTTP、dGTP)作为底物,同时Mg2+是不可缺少的激活剂。
② 带有 3?-端羟基末端的引物:DNA 聚合酶 I 所催化的聚合反应总是在引物的 3?-OH末端基团和搀入的 dNTP 之间发生的,且只能沿引物末端由 5?→3?方向延伸。
③ DNA 模板:可以是 ssDNA 或 dsDNA,后者只有在其主链上有一至数个断裂的情况下才能成为有效的模板。;实验室中,利用 DNA 聚合酶 I,通过 DNA 缺口平移的方法制备 DNA
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