基因芯片技术及临床应用.pptxVIP

基因芯片技术及临床应用;2;3;4;但直到1994 年Pease等人创造的光导原位合成高密、微化的寡核苷酸阵列(ODTA)的制作技术问世之后，才使该设想逐步成为现实。;6;7;8;9;10;11;12;13;原位光刻合成;15;引入5`端被X基团保护、3`端被活化的单核苷酸dNTP，使dNTP的3`端与基片上的活性羟基缩合，洗去未有效结合的dNTP（3）。 更换掩膜M2，重复1-2，直到所需要的探针阵列合成完毕（4-6）。;使用多种掩盖物能以更少的合成步骤生产出高密度的阵列，在合成循环中探针数目呈指数增长。 某一含ｎ个核苷酸的寡聚核苷酸，通过4×n个化学步骤能合成出4n个可能结构。;原位喷印合成;分子印章多次压印合成法;256*256分子印章阵列显微图?（0.18%) ;采用了平面微细加工技术，可实现大批量生产。通过提高集成度，降低单个芯片的成本 可组装大量的（104--106种）生物分子探针，获取信息量大，效率高，特别适合于基因信息的采集。 结合微机械技术（MEMS），可把生物样品的预处理，基因物质的提取，扩增，以及杂交后的信息检测相集成，制备成微物芯片。;高密度——分辨率高 准确性——合成产率高 一致性——工艺最优化 批量化——平面印刷法;合成点样;是将合成好的探针、cDNA或基因组DNA通过特定的高速点样机器人直接点在芯片上。 目前，除Affymetrix等研究和生产基因芯片的少数大公司使用原位合成外，其他中小型公司和实验室研究中仍然普遍采用合成点样法。 ;微型机械点样法;通过毛细作用使用点样针将生化物质转移到固体基底表面（点样针与基底表面接触）。 第一轮结束后，清洗点样针进行下一轮操作。 机器人控制系统可使其实现自动化生产。;化学喷射法;用与压电接口（方型）相连的微型喷嘴将生化物质喷向基底，通过电流控制使样品体积得到精确控制。 第一轮结束后，清洗喷嘴进行下一步。;29;30;31;Picture from Nanogne website: /;三维芯片;34;35;36;37;38;39;40;41;美国的Nanogen公司通过在微过滤芯片的电极上施加一系列高压脉冲对电极上分离得到的大肠杆菌细胞进行进行电子胞解，获得了大肠杆菌细胞内的各种RNA和DNA。;43;44;45;46;47;48;49;50;51;52;53;54;55;56;57;58;59;将所有n体亚序列探针都固定在一个固相支持物上，n体亚序列探针的序列与其在固相支持物上的位点一一对应形成探针阵列。 被标记的靶序列与芯片进行杂交后，芯片上所有杂交信号的位点组成一个“杂交模式”，该“杂交模式”实际上反应的是靶序列的所有n体亚序列信息，计算机通过对该“杂交模式”的分析就可以确定靶核酸的序列。 ;61;62;63;64;65;66;67;68;69;70;71;72;73;74;75;76;77;78;79;80;81;82;83;84;85;86;87;88;89;90;91;92;93;94;95;96;97;98;99;100;感谢观看！