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垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定 垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和 产物纯化与鉴定 ISSNl007—7626 CNl1-3870/Q 中国生物化学与分子生物 ChineseJournalofBiochemistryandMolecularBiol 2004年6月 20(3):376,382 垂体腺苷酸环化酶激活肽基因合成表达和产物纯化与鉴定 余榕捷,洪岸,张玲,周天鸿,戴云,高媛 (暨南大学生物工程研究所,广州510632) 摘要为利用基因工程技术获得垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclaseactivating polypeptide,PACAP),根据大肠杆菌的密码偏好性,设计并人工合成编码38个氨基酸的PACAP基 因.’克隆到表达载体pET一35b(+),构建重组质粒pET—PACAP,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.实 现纤维素结合域(cellulosebindingdomain,CBD)与PACAP融合蛋白的表达,并在两者之间引入(凝 血)因子Xa识另l位点(Ile—Glu—Gly—Arg).融合蛋白CBD—PAcAP 经纤维素亲和层析纯化后,因子Xa 酶切释放PACAP.在因子Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽 (Gly—Th卜Gly—Gly—Gly—Ser—Gly)明