高效液相色谱分析 .ppt

高效液相色谱分析 第一页，共三十四页，2022年，8月28日 第九章 高效液相色谱分析 第二页，共三十四页，2022年，8月28日 1-1 高效液相色谱法与气相色谱比较 气相色谱法分析样品限于气体和沸点较低的具有挥发性的化合物。液相色谱法分析的样品不受样品挥发和热稳定性的限制。 气相色谱法采用的流动相是惰性气体，他对被分离组分不产生相互作用力，仅起运载作用。而液相色谱中的流动相可选用多种多样的不同极性的液体，他对被分离组分可产生一定的作用力。 气相色谱分析一般在较高的温度下进行，而液相色谱则在常温条件下工作，并可对分析样品回收和纯化制备。 高效液相色谱是具有高压、高速、高效、高灵敏度的特点。 第三页，共三十四页，2022年，8月28日 （1）高压：以液体为流动相，流经色谱柱受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对液体施加高压150-350×105Pa。 （2）高速：高的分析速度。 （3）高效：采用5一10μm微粒固定相以提高柱效，可达3万塔板/米。 （4）高灵敏度：设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度。 第四页，共三十四页，2022年，8月28日 一、液-固色谱法(液-固吸附色谱法) 基本原理： 固定相多为固体吸附剂，在表面上存在着吸附中心。组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸，不同的分子由于固定相上的吸附作用不同而得到分离。 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性； 1-2 主要分离类型与原理 第五页，共三十四页，2022年，8月28日 固定相：分为极性和非极性两大类。 极性固体吸附剂为：硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁及分子筛等。 非极性固体吸附剂为：活性炭。 溶质分子与极性吸附中心的作用力会随着溶质分子上官能团极性的增加或官能团数目的增加而增加，保留值增大。 不同类型的有机化合物，在极性吸附剂上的保留顺序如下： 氟碳化合物＜饱和烃＜烯烃＜芳烃＜有机卤化物＜醚＜硝基化合物＜腈＜酯、酮、醛＜醇＜羧酸 第六页，共三十四页，2022年，8月28日 二、液-液分配色谱 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 分配系数： Cs和Cm分别表示溶质在固定相和流动相中的浓度。 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 第七页，共三十四页，2022年，8月28日 液-液分配固定相 （1）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见。 （2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量底； 第八页，共三十四页，2022年，8月28日 一般采用硅胶为载体，利用硅胶表面的硅醇基与多种有机分子成键，可以得到各种性能的化学键合固定相。 三、化学键合固定相色谱 第九页，共三十四页，2022年，8月28日 特点： （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （3）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （4）可用于梯度洗脱 机理： 由于键合固定相不能全部覆盖具有吸附能力的载体，所以既不是典型的液液分配过程，也不是全部吸附过程，而是双重机理兼而有之。 第十页，共三十四页，2022年，8月28日 四、 离子交换色谱 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4X + OH- 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3M + H+ 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 第十一页，共三十四页，2022年，8月28日 固定相 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团） 树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸性、弱酸