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微生物培养与应用新人教第1页/共32页第2页/共32页项目内　容要求考点1.微生物的实验室培养2.土壤中分解尿素的细菌分离与计数3.分解纤维素的微生物的分离ⅡⅠⅠ重难点微生物的培养和分离方法及微生物培养的具体操作第3页/共32页年份及高考卷考查知识点2010年山东2009年安徽、江苏微生物的培养和利用2010年重庆、安徽2009年广东微生物的培养及分离方法第4页/共32页1．(2009·安徽理综)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 (　)A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数第5页/共32页答案　D解析　检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的一组平板为代表进行计数。第6页/共32页2．(2010·重庆理综，31Ⅰ)炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病，炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状，对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。(1)细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。(2)细菌鉴定：实验流程下图所示第7页/共32页①对配制的液体培养基需采取________方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为________(填“无机碳”或“有机碳”)。②挑选可疑菌落制片后，用________观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。③接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是________，对照组试管中应加入________，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组________(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。第8页/共32页④对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体，与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有________。答案　(2)①高压蒸汽(98kPa蒸汽)；有机碳　②显微镜　③细菌大量繁殖；等量生理盐水；低　④吞噬细胞、效应B细胞第9页/共32页解析　(2)①细菌培养的培养基必须彻底灭菌，方法为高压蒸汽灭菌法；由于炭疽杆菌为寄生菌，为异养生物，因此培养基中应加入有机碳源。②观察菌落特征时，只有用显微镜才能看见杆菌的竹节状排列，肉眼、放大镜都不能完成该过程。③细菌在适宜条件下大量繁殖，使培养液浑浊；由过程图可见，实验组加入的是生理盐水配置的澄清噬菌体溶液，而对照组应该只加入等量食盐水；与实验组同时培养6小时后，由于实验组噬菌体将细菌侵染消灭，因此实验组液体浑浊度比对照组低，则可以说明培养液中有细菌(炭疽杆菌)存在。④在免疫预防的特异性免疫中，除相关的T、B细胞外，还有吞噬细胞处理呈递抗原和效应B细胞产生抗体。第10页/共32页要点归纳1．培养基(1)种类：按培养基的物理性质分为①液体培养基：配制成的液体状态的基质，一般用于生产。②固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)，配制成固体状态的基质，琼脂固体培养基是实验室中最常用的培养基之一。(2)培养基配方及营养要素基本营养要素：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐。此外还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。第11页/共32页2．无菌技术(1)消毒和灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌第12页/共32页(2)无菌技术具体操作①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。第13页/共32页3．纯化大肠杆菌以及菌种的保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。(2)纯化大肠杆菌①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。②方法：平板划线法、稀释涂布平板法。(3)菌种的保藏①短期保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。②长期保存：－20℃甘油管在冷冻箱中保藏