基因工程111工具酶.pptxVIP

基因工程111工具酶;;基因克隆与表达;一 基因工程的基本元件 ------工具酶; 第一节 限制性内切酶 定义:能够识别和切割双链DNA(dsDNA)分子内特异核苷酸 顺序的核酸内切酶,叫做限制性核酸内切酶.;一、II型限制性内切酶切割类型;2.1 产生5’粘性末端 ;第8页/共39页;同尾酶 这一类的限制酶来源各异，识别的靶序列也不相同，但产生相同的粘性末端。;酶的星号活性 当酶切条件改变时，酶的专一性可能会降低，以至于同一种酶可识别和切割多个的位点。;双酶切方法;三、限制性内切酶分析方法;;;;;DNA连接酶 ;二、DNA连接酶的连接范围 ;三、DNA连接酶的连接条件 ;五、T4 DNA连接酶的反应条件;DNA聚合酶的特点： 1.以四种脱氧核糖核苷酸为底物 2.需模板DNA； 3.需引物； 4.新链的合成方向为5’-3’;三、DNA聚合酶的活性;四、Klenow酶;2.Klenow酶的三维结构;;;五、DNA聚合酶的应用 ;5.1 来源： 水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1 5.2 活性： 聚合最适温度为75-80℃， 不具3’→5’外切酶活性， 具5’→3’外切活性 。;反转录酶（reverse transcriptase） ;①依赖RNA的DNA聚合酶活性 ;三、用途;一、单链核酸酶（S1/ Bal31 Nuclease) ;2.Bal31单链核酸酶的用途 ;第34页/共39页;末端转移酶;①ssDNA 3’-OH加尾 ;三、碱性磷酸酶与磷酸激酶;OH;谢谢观看！