实验七饥饿与饱食对肝糖原含量的影响.pptxVIP

实验七饥饿与饱食对肝糖原含量的影响第1页/共13页 实验七饥饿与饱食对肝糖原含量的影响第2页/共13页 一、实验目的和要求1.掌握饥饿与饱食对小白鼠肝糖原含量的影响2.熟悉肝糖原提取鉴定的原理和方法3.掌握低速常温离心机的使用，了解离心技术第3页/共13页 二、实验原理 肝糖原是由许多葡萄糖分子聚合而成的物质，是动物机体能够迅速动用的糖储存形式之一。第4页/共13页 二、实验原理 血糖肝糖原 分解 糖原合成 肝（肌）糖原 胰高血糖素 胰岛素 第5页/共13页 二、实验原理 提取:用三氯醋酸破坏肝组织的蛋白质和酶，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇将糖原从滤液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。性质:糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。定量:肝糖原在浓硫酸中水解为葡萄糖后，分子内部脱水缩合成5-羟甲基-α-呋喃甲醛。后者与蒽酮反应生成蓝色化合物，在620nm波长下有最大光吸收。第6页/共13页 三、器材和试剂1.主要器材：手术盘、剪刀、镊子、天平、研钵、离心机、离心管、恒温水浴箱、分光光度计、微量进样器、试管及试管架、白瓷凹皿2.主要试剂：（1）蒸馏水（2）5%三氯乙酸（3）标准的葡萄糖溶液：0.5ml相当于25ug葡萄糖（4）95%乙醇（5）碘试剂：I2 100mg 及KI 200mg溶解于30ml蒸馏水中（6）0.2%蒽酮试剂第7页/共13页 四、操作第8页/共13页 四、操作小白鼠断头处死0.5g肝脏2ml 5%三氯乙酸研钵中研为匀浆离心管3ml 蒸馏水洗涤上清液转移至另一离心管中4000rpm 离心3min沉淀即为初步纯化糖原。加2ml H2O溶解，吹打混匀，即为肝糖原提取液加5ml 95%乙醇，混匀，静止1min，4000r/min离心5min观察对比两组溶液现象取0.5ml定量检测 取2滴于白瓷凹皿中观察、记录两组颜色，与蒸馏水比较加入碘试剂1滴第9页/共13页 四、操作第10页/共13页 四、操作第11页/共13页 四、操作第12页/共13页 感谢您的欣赏第13页/共13页