大肠菌群检验.pptxVIP

大肠菌群检验第1页/共24页 检验程序检 样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤管不产气产气煌绿乳糖胆盐（BGLB)肉汤不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查MPN表报告结果36℃±1℃48h±2h36℃±1℃48h±2h检样初发酵复发酵报告第2页/共24页 检 样固体样品：在电子天平上称取25g + 225mL0.85%灭菌生理 盐水液体样品：直接取用固体样品存放罐第3页/共24页 固体样品称量用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始称量。去皮键第4页/共24页 初 发 酵取（带上试管架）：单料管9支装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管3支第5页/共24页 操 作 步 骤1. 用酒精棉消毒操作台第6页/共24页 操 作 步 骤2. 用酒精棉消毒双手第7页/共24页 操 作 步 骤3. 点燃酒精灯第8页/共24页 操 作 步 骤4. 为装有培养基的试管编号第9页/共24页 为试管编号编号原则：固体样品：1、0.1、0.01（表示加入的固体样品为1g、0.1g、0.01g）液体样品：10、1、0.1（表示加入的液体样品为10mL、1mL、0.1mL）双 料单 料1110.10.10.10.010.010.011010101110.10.10.1第10页/共24页 用量筒量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。（注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内）固体样品称量后处理第11页/共24页 液 体样 品液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意： 加样液后不能振摇试管。第12页/共24页 液体样品：吸取25mL液体样品至稀释瓶中，加入225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。液 体样 品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意： 加样液后不能振摇试管。第13页/共24页 固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管中分别吸取1mL样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意：将样液加入装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液加入培养基后不能振摇试管。第14页/共24页 观察初发酵结果取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。第15页/共24页 根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，则取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。内有小倒管复 发 酵第16页/共24页 在有气泡的初发酵管后的相应位置放上复发酵管 用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。（注意接种环的灼烧、冷却）第17页/共24页 将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。注意选择设置为36℃±1℃的培养箱。36℃±1 ℃48h ±2h 第18页/共24页 观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性（+），无气泡为阴性（-）。+--+---+-注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。第19页/共24页 查MPN表 1 1 1 11第20页/共24页 检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL／／／／／／／1g（或mL）+--+--10.1g（或mL）++-+--10.01g （或mL）-+--+-10.001g （或mL）／／／／／／／培养条件温度： 时间：温度： 时间：检验结果 MPN/g = 1.1备注标准值： 单项检验结论：符合（不符合） 检验人： 检验日期：固体样品第21页/共24页 检验结果记录检样量初发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数10mL+--+--11g（或mL）++-+--10.1g（或mL）-+--+-10.01g （或mL）／／／／／／／0.001g （或mL）／／／／／／／培养条件温度： 时间：温度： 时间：检验结果 MPN/mL = 0.11备注标准值： 单项检验结论：符合（不符合） 检验人：