单个核细胞分离.pptxVIP

单个核细胞分离;实验内容;实验目的;细胞分离纯化的目的;Ficoll密度梯度离心法; 比重：1.070;实验材料;实验步骤;;细胞计数方法;淋巴细胞分离及检测技术;第12页/共37页;;免疫细胞的分离 ——免疫细胞的分离原理及方法 ;免疫细胞：直接参与免疫应答及与免疫应答相关的所有细胞的总称。; ? 一.?? 外周血单个核细胞（PMBC）分离 二.??淋巴细胞亚群的分离及鉴定（表面标志选择性纯化淋巴细胞亚群）; ? 1.??细胞膜脆性：低渗液分离 2.??细胞密度：密度梯度离心法 3. 细胞表面标志：流式细胞术，磁珠分离术 4. 细胞黏附性：黏附玻璃，塑料，尼龙毛;（一）外周血单个核细胞（PBMC）的分离;PBMC的比重——1.075;;血浆;（二）T、B 淋巴细胞的分离;2、T、B淋巴细胞的分离纯化;E花环分离法;（三）小鼠腹腔巨噬细胞的分离;免疫细胞的功能检测 ——功能检测的原理及方法 ;免疫细胞功能检测的意义;一、免疫细胞的数量检测;;;;淋巴细胞转化试验的检测方法;(一)免疫荧光法 (二)免疫酶标法 (三)荧光激活细胞分类仪检测T细胞亚群;(一)免疫荧光法 直接法:荧光素→单克窿抗体→淋巴细胞 间接法:荧光素→第二抗体(羊或兔的抗鼠IgG) →McAb介导→淋巴细胞 ; (二)免疫酶标法 ABC法:亲和素＋酶标生物素→复合物→生物素化的二抗→McAb介导和酶催化底物作用→T细胞着色;(三)荧光激活细胞分类仪(FACS)检测T细 胞亚群 ;第37页/共37页;感谢观看！