生物化学合工大核酸的酶促降解和核苷酸代谢.pptxVIP

生物化学合工大核酸的酶促降解和核苷酸代谢第1页/共33页 第一节 核酸的酶促降解 一、核酸酶二、限制性内切酶 核酸酶 核苷酸酶 核苷磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖-1-P磷酸第2页/共33页 核 酸 酶1、核酸酶的分类（1）根据对底物的 专一性分为（2）根据切割位点分为核糖核酸酶(RNase)脱氧核糖核酸酶(DNase)非特异性核酸酶核酸内切酶核酸外切酶2、核酸酶的作用特点第3页/共33页 外切核酸酶对核酸的水解位点5′ p p p pOHB p p p p3′BBBBBBB牛脾磷酸二酯酶（ 5′端外切5得3）蛇毒磷酸二酯酶（ 3′端外切3得5）第4页/共33页 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图5′ p p p pOHPyPuPyPy1′ p p pGACU p p pGA3′RNAase IRNAase IRNAase T1RNAase T1Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 第5页/共33页 限制性内切酶? 类型? 命名? 意义 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的具有二重旋转对称性的回文序列，并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平末端，这类酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）。第6页/共33页 常用的DNA限制性内切酶的专一性酶辨认的序列和切口说明‥ ‥A G C T ‥‥‥ ‥T C G A ‥ ‥‥ ‥G G A T C C ‥‥‥ ‥C C T A G G ‥‥‥ ‥A G A T C T ‥‥‥ ‥T C T A G A ‥‥‥ ‥G A A T T C ‥‥‥ ‥C T T A A G ‥‥‥ ‥A A G C T T‥‥‥ ‥T T C G A A ‥‥‥ ‥G T C G A C ‥‥‥ ‥C A G C T G ‥‥‥ ‥C C C G G G ‥‥‥ ‥G G G C C C ‥‥Bam H IAlu IBgl IEco R IHind ⅢSal ISma I四核苷酸，平端切口六核苷酸，平端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口第7页/共33页 限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列 ，切割位点在顺序之外离识别 序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶.第8页/共33页 限制性内切酶的命名和意义Eco R I序号属名种名株名例：Eco R I，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具，是一把天赐的神刀，用来解剖纤细的DNA分子。第9页/共33页 第二节 核苷酸的降解二、嘧啶的降解一、嘌呤的降解 核苷酸酶 核苷磷酸化酶核苷酸 核苷 碱基+（脱氧）戊糖-1-P磷酸第10页/共33页 嘌呤的分解第11页/共33页 嘧啶的分解第12页/共33页 第三节 核苷酸的合成代谢一、核糖核苷酸的生物合成二、脱氧核糖核苷酸的生物合成三、单核苷酸转变成核苷二磷酸和核苷 三磷酸（自学）四、各种核苷酸的相互转变第13页/共33页 核糖核苷酸的生物合成1、嘌呤核苷酸的生物合成(1) 从头合成途径(2) 补救途径(自学)2、嘧啶核苷酸的生物合成(1) 从头合成途径(2) 补救合成途径(自学)第14页/共33页 嘌呤环上各原子的来源来自谷氨酰胺的酰胺氮来自“甲酸盐”来自天冬氨酸来自甘氨酸来自CO2来自“甲酸盐”第15页/共33页 5-磷酸核糖焦磷酸5-磷酸核糖胺甘氨酸甘氨酰胺核苷酸甲酰甘氨酰胺核苷酸甲酰甘氨咪核苷酸5-氨基咪唑核苷酸5-氨基咪唑-4-羧核苷酸IMP的 生物合成5-氨基咪唑-4-琥珀基-甲酰胺核苷酸5-氨基咪唑-4-氨甲酰核苷酸5-甲酰氨基咪唑-4-氨甲酰核苷酸次黄嘌呤核苷酸（IMP）甲酰