生物学发酵液的预处理.pptxVIP

生物学发酵液的预处理第1页/共70页第2页/共70页第一节 概述 一、发酵液的一般特征 1、发酵液的组成 （1）大部分是水； （2）细胞或碎片； （3）少量未用完的培养基； （4）一定量的代谢产物及副产物。 第3页/共70页 2、发酵液的特性 （1）发酵产物浓度较低，大多为1%~10%；大部分为水，一般为90%~99%。 （2）发酵液中的悬浮固形物主要是菌体和蛋白的胶状物，其颗粒小，带电荷，可形成稳定的胶体溶液；相对密度与液相相差不大；固体粒子可压缩性大；液相粘度大，大多为非牛顿型流体。 （3）发酵液中含有培养基成分，对后续操作产生一点影响。 （4）发酵液中有代谢产物及性质相似的副产物 （5）发酵液中还含有色素、毒性物质、热原质等有机杂质，导致其性质不稳定，随时间变化。（空气氧化、微生物污染、蛋白酶水解）第4页/共70页第5页/共70页 二、发酵液预处理的目的和要求 1、发酵液预处理的目的 （1）改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离器的效率； （2）尽可能使产物转入便于后续工序处理的某一相中（多数是液相）； （3）去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作。第6页/共70页 2、发酵液预处理的要求 预处理要满足以下要求，才能达到目的。（1）菌体分离 采用离心和过滤方法。 胞外产物，预处理时应尽可能使产物转移到液相，然后用固液分离除去固相。 胞内产物，则应先收集菌体或细胞，经细胞破碎后，使产物转移到液相，再用固液分离除去细胞碎片。 第7页/共70页（2）固体悬浮物的去除 采用过滤方法，获得澄清液（3）蛋白质的去除：可溶性蛋白（4）重金属离子的去除（5）色素、毒性物质、热原质等有机杂质的去除（6）改变发酵液的性质，以利于提取和精制后续工序操作的顺利进行（7）调节适宜的pH和温度第8页/共70页第二节 发酵液预处理的方法 发酵液预处理的方法有三类：提高过滤速度的方法、改变发酵液性质的方法、杂质去除的方法。 具体方法有凝聚与絮凝方法、加热法、加水稀释法、调节pH法、加入助滤剂法、加入反应剂法、加吸附剂法或加盐法、高价无机离子去除的方法、可溶性杂蛋白去除的方法、色素及其他杂质去除的方法等。第9页/共70页 一、凝聚与絮凝方法 采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，破坏其稳定性，使其聚结成较大的可分离的颗粒，以提高过滤速率，便于分离；同时，还能有效地除去杂蛋白质和固体杂质，提高滤液质量。 工业最常用方法之一。 凝聚和絮凝是两种方法，两个概念。第10页/共70页 凝聚是向胶体悬浮液中加入某种电解质，在电解质的异电离子作用下，由于胶体粒子之间双电层电排斥作用降低，电位下降，使胶体体系不稳定（脱稳），胶体粒子间因相互碰撞而聚集成1mm大小块状凝聚体的过程。 絮凝是指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，将胶体粒子交联成网，形成l0mm大小絮凝团的过程。第11页/共70页 1、凝聚 （1）凝聚机理 （原理） 凝聚剂的作用有些是对初始粒子表面电荷的简单中和；另一些是消除双电荷层（采用中性盐例如NaCl等）而脱稳；还有一些是通过氢键或其他复杂的形式与粒子相结合而产生凝聚。 第12页/共70页 双电层的形成及作用 发酵液中的菌体、细胞或蛋白质等胶体粒子的表面，由于吸附溶液中的离子和自身基团的电离，一般都带有电荷。 在生理pH值下，菌体或蛋白质常常带有负电荷，由于静电引力的作用，使溶液中带相反电荷的阳离子被吸附在其周围，在界面上形成双电层。 这种双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。双电层的电位越高，电排斥作用越强，胶体粒子的分散程度也就越大，发酵液过滤就越困难。第13页/共70页 凝聚值：使胶体粒子发生凝聚的最低电解质浓度（mmol/L），表示电解质的凝聚能力。 反离子的价数越高，凝聚值就越小，即凝聚能力越强。 阳离子对带负电荷的发酵液胶体粒子凝聚力的次序：Al3+＞Fe3+＞H+＞Ca2+＞Mg2+＞K+＞Na+＞Li+ 第14页/共70页 （2）凝聚剂种类 主要是一些无机类电解质，由于大部分被处理物质的颗粒带负电荷，工业上常用的凝聚剂大多为阳离子型，分为： 无机盐类 ：如硫酸铝、矾、硫酸铁和硫酸亚铁。 金属氧化物类 ：如氢氧化铝、氢氧化铁、氢氧化钙或石灰等。 聚合无机盐类 ：如聚合铝和聚合铁等。第15页/共70页 2、絮凝 （1）机理：絮凝剂主要起架桥作用，即一个高分子聚合物（絮凝剂）的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架联接时，形成了较大的絮团。第16页/共70页 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子量可达数万至一千万，具有长链状结构，其链节上含有许多活性官能团。通过静电引力、范德华力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。 絮凝剂的