DNSAA双向聚酰胺薄膜层析.pptxVIP

DNSAA双向聚酰胺薄膜层析;;层析的两种相;按层析过程的机理分类： 分配层析: 根据不同组分在不同溶剂中分配系数不同而使物质分离的方法称为分配层析。 吸附层析:吸附是两相成一界面，溶质在表面密集的现象。以吸附剂为固定相，根据待分离物与吸附剂之间吸附力不同而达到分离目的的一种层析技术称为吸附层析。常用吸附剂：活性碳、硅。 离子交换层析: 是以离子交换剂为固定相，根据物质酸碱度、极性和分子大小差异而将物质予以分离的一种方法。 凝胶层析（分子筛）利用凝胶颗粒形成具有三维空间多孔性网络结构的物质，不带电荷，可起滤过或“筛”的作用。 亲和层析是利用生物分子间所具有的专一性亲和力的层析技术。;层析法分类;层析法分类;吸附层析;分配层析技术 （液-液层析法）;分配层析技术;分配层析技术;亲和层析法;亲和层析示意图;离子交换层析;原理 聚酰胺薄膜层析是一类特殊的分配层析。混合物随流动相通过聚酰胺薄膜时，由于被分离物质与薄膜形成氢键，而各物质形成氢键的能力不同，决定吸附力的差异，吸附力强,展层速度慢，吸附力弱，展层速度快。 展层溶剂与被分离物质在聚酰胺离子表面竞争形成氢键，选择适当的展层溶剂，使被分离物质在溶剂与聚酰胺薄膜表面之间的分配系数有最大差异。易溶于展层剂的所受的动力作用大，展层速度快，反之，速度慢。;本实验中，聚酰胺上的氨基与氨基酸（AA）的羰基形成氢键，酰胺基团上羰基与AA中羟基或酚基形成氢键。由于有些AA结构相似，如只采用一种溶剂系统进行单向层析，难达到完全分离的目的。因此可选择另一溶剂系统进行第二向层析。这种层析方法称为双向层析。 第一向：苯－冰醋酸溶剂 第二向：甲酸－水 显色：二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl）可与氨基酸的游离氨基结合成DNS-氨基酸。形成的DNS-氨基酸在紫外光下呈黄色荧光。 ;实验操作;3、操作注意事项： 严格控制点样位置以及点样直径。 展层时勿将点样点浸入展层剂中。 展层后必须经电吹风将膜吹干。 紫外光对眼睛有害不要把头伸到灯下观察。;;感谢观??！