抗生素发酵工程.pptxVIP

抗生素发酵工程;第一节 抗生素概论; 据世界卫生组织(WHO)1999年统计，全世界每年有1400万人死于感染病，占死亡人数的第一位，其次是心脏病、癌症和脑疾病，分别为750万人、700万人和550万人。 一种新的抗生素研制的费用大约需要十几亿美金和10到15年的过程，而使用不当，3到5年病菌就会对这种药物产生耐药性。 我国的金黄色葡萄球菌的耐青霉素比例已经高达90%，造成肺炎的病菌在社区的标本有20%可以耐药，而在医院内这一比例可以达到60%。肺炎链球菌已有45%耐青霉素，70%耐红霉素。 ;二、青霉素的发现者及1945年诺贝尔生理学医学奖获得者;三、微生物产生抗生素;2、细菌产生抗生素 芽孢杆菌属：多粘芽孢杆菌和 枯草芽孢杆菌 假单胞菌属：铜绿假单胞菌（绿脓杆菌） 杆菌肽、粘杆菌素、多黏菌素等多肽类。 3、真菌产生抗生素 青霉属：青霉素、灰黄霉素。 头孢菌属： 头孢霉素;四、抗生素的分类（一）;;抗生素的分类（二）;抗生素的分类（三）; 红霉素A 克拉霉素 罗红霉素 氟红霉素 R1 H CH3 H H R2 O O NOCH2O(CH2)2OCH3 O R3 H H H F;抗生素的分类（四）;作用机制（一）;作用机制（二）;作用机制（三）;作用机制（四）;作用机制（五）;作用机制（六）;五、抗生素产生菌的选育 1、抗生素产生菌的分离 2、抗菌性试验 3、抗生素产生菌的改良 (1)人工诱变 (2)原生质体融合 ;(3)体外DNA重组;六、抗生素的提纯;⑴抗生素提纯的基本步骤和原则 3个基本步骤：发酵液过滤和预处理、粗纯化、精制 4个原则：时间尽量短；采用适当较低浓度；条件适宜，pH适度，温度适宜；防止杂菌污染。 ⑵提取方法：吸附、萃取、离子交换、沉淀 ⑶色谱分离、分子筛过滤、透析等等;第二节 青霉素的发酵工艺;1、青霉素的产生菌;2、青霉素的作用机制、抗菌谱及稳定性 (1)作用机制：抑制细菌的转肽酶，阻止细胞壁合成中的交叉连接步骤，使处于繁殖分裂期的细菌细胞壁的合成发生障碍，导致菌体细胞壁损坏???使细胞内因渗透压等原因发生溶解而死亡。 (2)抗菌谱：作用于大多数革兰氏阳性细菌及部分革兰氏阴性细菌。 (3)稳定性：弱酸性的有机化合物，干燥纯净的青霉素盐很稳定，pH5-7，6最稳定。;5、青霉素发酵工艺流程及发酵控制;(1)培养基的成分 组成和配比对菌体生长发育、发酵单位及质量 C源：碳水化合物，葡萄糖、乳糖 N源：玉米浆、黄豆粉；硝酸铵、氯化铵 无机盐：各种离子 前体物质：苯乙胺、苯乙酸 (2)发酵工艺控制：二级发酵，菌龄、特性、生长环境 (3)补料及控制：糖、硫酸铵、苯乙酸、氨水、玉米油 (4)发酵温度、pH及通气搅拌的控制：温度：26-27℃，pH:6.6-6.9，通气搅拌：1：0.95;(5)青霉素的提取 发酵液预处理→萃取→脱色→反萃取→过滤洗涤→干燥 ①发酵液预处理：A 加热使蛋白质变性沉淀；B 加絮凝剂使蛋白质沉淀 C 固液分离离心 ②萃取工艺过程：二级逆流萃取;A、萃取目的：杂质多，含量少。 原理：分配定律，青霉素G在水中溶解度小，易溶于醋酸丁酯、醇等有机溶剂中，青霉素盐易溶于水，不溶于有机溶剂。 青霉素在滤液中以盐存在，加入酸和醋酸丁酯，溶于有机相中，在醋酸丁酯中加入碳酸钾，6.2-7.2，形成盐转入水相中，实现反萃取。 ;B、影响萃取因素 a、pH：反复调节pH，青霉素不稳定，易发生降解、异构化、重排，β-内酰胺环是功能性。 b、温度：加热会加快其降解反应 c、工艺过程及浓缩倍数，级数越高、纯度越高但收率越低。 d、微生物污染：杂菌：β-内酰胺酶和青霉素酰胺酶 e、萃取时间：青霉素在水中的半衰期18.5min。;6、青霉素的精制 制成碱金属盐： 碱金属盐稳定性大；青霉素在水中的稳定性差，水解快。 (1)结晶工艺： A、醋酸丁酯中直接结晶：加入醋酸钾-乙醇----碳酸钾、丁醇-水真空共沸蒸馏。 B、丁醇-水共沸结晶：青霉素的碱金属盐溶于水，在丁醇中不溶解，稳定，丁醇和水形成二元共沸物蒸出，丁醇带出水分，不断加入丁醇，可使水分不断减少，结晶析出。;(2)过滤、洗涤、干燥 结晶后用真空抽滤来处理母液