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B A A 5‘ B B A B A PCR PCR 5‘ 5‘ 5‘ Streptavidin Column NaOH cofactor 体外选择技术筛选具有自我裂解功能的DNA分子 N50(DNA分子库） 第三十页，共六十一页，2022年，8月28日 10-23型脱氧核酶作用机理 R Y R RNA substrate 切割点 R=A or G Y=C or U deoxyribozyme 5? 3? 第三十一页，共六十一页，2022年，8月28日 手枪型脱氧核酶自我剪切作用机理 茎II (催化部位) 茎I(结合部位) 5‘ 3‘ 3‘ C A 切割点 10 20 30 40 第三十二页，共六十一页，2022年，8月28日 第三节　 抗体酶 通过生物体免疫系统诱导产生的，具有底物过渡态结合部位的抗体，有很高的催化活性。 抗体酶首先是抗体，具有高度选择性，同时又具有酶提高化学反应速度的性质。 第三十三页，共六十一页，2022年，8月28日 一、抗原和抗体 抗原 抗原抗体反应 第三十四页，共六十一页，2022年，8月28日 免疫球蛋白IgG的一级结构 第三十五页，共六十一页，2022年，8月28日 IgG的三级结构 第三十六页，共六十一页，2022年，8月28日 IgG与抗原形成 的交联晶格 第三十七页，共六十一页，2022年，8月28日 二、 抗体酶的原理及发展简述 1946年，Linus Pauling阐明酶与反应物的过渡态而不是基态发生特异结合。 1969年，Jencks提出通过免疫诱导产生抗底物过渡态的抗体，该抗体具有类似酶的催化活性。 1975年，Kohler和Milstein发明了单克隆技术，使抗体酶的获得成为可能。 第三十八页，共六十一页，2022年，8月28日 三、抗体酶催化的反应： 左边是 酯 诱导反应 的半抗原 酰胺 脱羧 分子重排 第三十九页，共六十一页，2022年，8月28日 抗体酶的催化特征 1、与天然酶相比 能催化一些天然酶不能催化的反应 有更强的专一性和稳定性 2、抗体酶和抗体比较 更高的反应特异性 反应过程 第四十页，共六十一页，2022年，8月28日 四、抗体酶如何生产？ 1、拷贝法： 优点:可以大量生产单克隆抗体酶 缺点:有相当大的盲目性和偶然性，并不能产生新酶。 酶 第一次免疫 抗酶抗体 第二次免疫 抗体酶 拷贝法制备抗体酶 第四十一页，共六十一页，2022年，8月28日 2. 诱导法 关键：用什么样的抗原才能诱导出有特定的酶催化功能的抗体？ 第四十二页，共六十一页，2022年，8月28日 五、抗体酶的筛选 1、ELISA法；筛选对半抗原有亲和力的单克隆抗体 2、酶学活性检测法：直接用反应底物检测细胞培养液中抗体的酶活性 3、短过渡态类似物法：以过渡态类似物中含有的必需基团的基本结构单元做为筛选单克隆抗体的标准。 4、基因筛选法 ：应用基因探针，对基因抗体库进行分析和筛选。 第四十三页，共六十一页，2022年，8月28日 酶 联 免 疫 分 析 ELISA是将酶作为标记物质，使之和抗原结合形成酶与抗原复合物 然后再根据待测抗体与复合物专一且定量的结合关系，通过测定待测抗体结合的标记酶活力，从而计算出抗原的量 第四十四页，共六十一页，2022年，8月28日 酶标免疫分析示意图 第四十五页，共六十一页，2022年，8月28日 六、抗体酶的应用前景 1、 抗体酶在帮助戒毒方面的应用 Landry等用可卡因水解的过渡态类似物为半抗原，产生的单克隆抗体能催化可卡因的分解 水解后的可卡因片断失去可卡因刺激功能 第四十六页，共六十一页，2022年，8月28日 2.抗体酶用于肿瘤治疗 抗体介导前药治疗（ADEPT）技术 将能水解前药释放出肿瘤细胞毒剂的酶和肿瘤专一性抗体相偶联 第四十七页，共六十一页，2022年，8月28日 第四节 模拟酶 用合成高分子来模拟酶的结构、特性、作用原理以及酶在体内的化学反应过程 第四十八页，共六十一页，2022年，8月28日 模拟酶的主要研究内容 模拟酶的金属辅基 模拟过氧化氢酶分子中的铁卟啉辅基 催化速率是血红蛋白的一万倍 三亚乙基四胺与三价铁离子的络合物 第四十九页，共六十一页，2022年，8月28日 第一页，共六十一页，2022年，8月28日 内容 核酶 脱氧核酶 抗体酶 模拟酶 第二页，共六十一页，2022年，8月28日 第一节　核酶　Ribozyme 一、发现 80年代初期，美国科罗拉多大学博尔德分校的Thomas