【DNA重组】分子生物学-09-2-电泳技术.pptx

分子生物学讲义5.2.1 电泳;;;;;;;垂直 管式凝胶电泳仪;;;;;;;;;电泳法 ;;;;琼脂糖凝胶的特点;琼脂糖凝胶电泳 优点;常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定， DNA限制性内切核酸酶图谱制作 质粒分离等。 ;DNA的琼脂糖凝胶电泳分离原理 ;1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系;（2）琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 ;影响琼脂糖电泳迁移的主要因素;2、核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系;3、电泳方法;（2）缓冲液系统;;（3）凝胶的制备;（4）样品配制与加样;（5）电泳;（6）染色和拍照;实验操作 ;;;;;;;;;;;;;;;;脉冲电场凝胶电泳（PFGE） 1984年，D.R.Cantor发明的。分离超大分子量的DNA分子。 在脉冲电泳中，电场方向是周期变化的，头一个脉冲电场方向与核酸的移动方向成45 ℃角，下一个脉冲的电场方向与核酸移动方向在另一侧成45 ℃角，由于加在琼脂糖凝胶电泳上的电场方向、电流大小、以及作用时间都在交替地变换着，这就使得DNA分子必须随时调整其泳动的方向，来适应凝胶孔隙的无规则变化。 与分子量小的DNA分子相比，分子量大的DNA分子需要较多的次数来更换其构型和方位，使之能够按新的方向游动，所以迁移率就慢，从而达到了分离大分子量DNA分子的目的。 ;PFGE can resolve large DNA fragments;