质粒DNA的提取定量PCR鉴定.pptxVIP

质粒DNA的提取定量PCR鉴定;一、实验流程;二、实验目的;聚合酶链式反应(PCR) Polymerase Chain Reaction;仪器: PCR仪(BioRad MJ mini) 台式离心机 灭菌的薄壁离心管 微量加样枪 凝胶电泳系统等 凝胶成像系统;;1、 菌液：DNA模板 大肠杆菌DH5a菌株(含靶基因CHD5片段的pMD19-T);2、引物： 正向引物： 5’ GTA　AAA　CGA　CGG　CCA　GT 3’ 反向引物: 5’ CAG　GAA　ACA　GCT　ATG　AC3’ 3、2×Premix ： Taq酶：5U/μl 4×dNTP: 10mM each 10×buffer: 500mM KCl , 100mM Tris-HCl (pH 8.3) MgCl2: 25mM 4、灭菌去离子水;① 94℃预变性2 分钟后开始以下循环 ② 94℃ 30 秒 55℃ 30 秒 30 循环 72℃ 60 秒 ③ 72℃ 8 分钟； ④ 4 ℃ 保温。 实验过程约1小时30分钟;;灭菌去离子水;四、结果分析;* 由1985年穆里斯（K. Mullis）发明，他也因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。