实验一质粒的提取碱法.pptxVIP

实验一质粒的提取碱法;实验一 质粒的提取(碱法); 实验目的 实验原理 实验仪器、材料与试剂 实验步骤 实验结果及讨论 ;实验目的;实验原理;结构的三大要素： 多克隆位点 选择标记（耐药性，LacZ） 独立的复制单位 种类： 质粒 噬菌体 酵母人工染色体（YAC） 反转录病毒载体 表达载体等;第7页/共29页;pBC SK map ;T-载体;在碱性条件（pH 12.5）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。当加入乙酸钾恢复至中性时，染色体DNA分子难以复性，而质粒DNA分子很快复性，离心时染色体DNA与细胞碎片一起被沉淀出来，而质粒DNA则留在上清液中。 用异丙醇或乙醇沉淀后洗涤，可得到较纯的质粒DNA。 ;实验仪器、材料与试剂 ;第12页/共29页;第13页/共29页;第14页/共29页;第15页/共29页;第16页/共29页;（二） 材料 ;（三） 试剂 ;2. SolutionⅠ 　50 mmol/L 葡萄糖 　 25 mmol/L Tris.·Cl (pH 8.0) 　 10 mmol/L EDTA (pH 8.0) 高压灭菌后，4℃保存备用。 3. SolutionⅡ(现用现配制) 0.2 mol/L NaO