中药制剂的含量测定课件.pptVIP

第四节 薄层扫描法 （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS ） 一、定义 薄层扫描法（TLCS）系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析的方法。 二、特点 具有分离分析双重功能。与高效液相色谱法比较，具有多通道效应，可同时平行分离分析多个样品；流动相用量少且选择范围宽、更换方便；固定相为一次性使用，对样品的预处理要求不高等优点。目前随着制板、点样、展开等操作的仪器化及仪器性能的改进，该法检测的灵敏度，结果的精密度与准确度均大大提高，在中药及其制剂检验中，已成为重要的分析方法。《中国药典》中有32个中成药品种采用该法进行含量测定。 三、仪器及其工作原理 1.薄层扫描仪 中国药典采用双波长薄层扫描仪。常用的有岛津CS-930型和CAMAG-Ⅱ型等。 2.扫描仪工作原理 3.测定方式 （1）吸收法 适用于有紫外（可见）吸收的成分，较常用。该法又可采用反射法或透射法测定。理论上讲，透射法比反射法优越，但实际工作中常用反射法，因为紫外光不能通过玻板。 （2）荧光法 适用于有荧光性质的成分，例如小檗碱等。该法仅采用反射法测定，其灵敏度比吸收法高。 4.测定波长 （1）单波长 一般用于荧光测定法，即用某一波长的紫外光（激发光）进行扫描。对玻板和斑点的质量要求较高。 （2）双波长 主要用于吸收测定法。该法可消除背景干扰，对玻板和斑点的质量要求不高，故较常用。测定时，样品波长（λs）和参比波长（λR）依次扫描斑点，所测吸收度为ΔA=Aλs －AλR 样品波长（λs）：即被测成分的λmax 参比波长（λR）：即被测成分的λmin或此波长处无吸收。 5.光束扫描方式 （1）直线扫描 适用于规则的斑点，仅用于荧光测定法。 （2）锯齿扫描 适用于不规则的斑点，测量误差小，被测成分积分值重现性好，故吸收测定法常用此扫描方式。 6.光源 （1）钨灯（W） 供可见光（350～800nm）测定，扫描有色成分的斑点。 （2）氘灯（D2） 供紫外光（200～400nm）测定，扫描有紫外吸收的成分斑点。 （3）氙灯（Xe） 供荧光测定，发射不连续光谱，常用波长为365nm。 四、含量测定方法（外标法） TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。 1.原理 外标法系将一定量的供试品溶液和对照品溶液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点，测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。 2.类型 根据对照品标准曲线性质的不同，外标法又分为外标一点法和外标两点法。 若标准曲线通过原点，采用外标一点法。 若标准曲线不通过原点，采用外标两点法。 外标一点法的直线方程： C = F A F 为斜率外标两点法的直线方程：  、 F1为斜率 F2为截距 3.操作步骤 （1）对照品溶液的制备 （2）供试品溶液的制备 （3）点样 一般要求使用市售薄层板。 ①外标一点法：至少6个原点 对照品（R）2个（同一质量）：2R 供试品（S）4个（同一质量）分2组：2S1 2S2 ②外标两点法：至少8个原点 对照品（R）4个 分2组 大质量的2个：2R1 小质量的2个：2R2 供试品（S）4个（同一质量）分2组： 2S1 2S2 对照品与供试品应交叉点加在同一块薄层板上，目的在于消除各种误差。测定时应保证供试品原点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量。 外标两点法 外标一点法 （4）展开 （5）显色定位 供试品色谱中待测斑点的比移值（Rf值）和光谱扫描得到的吸收光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。 （6）扫描 应沿展开方向扫描，不得横向扫描。 （7）含量计算 ①外标一点法 ▲求出供试品被测成分（斑点