育种出发菌的分离筛选.pptxVIP

育种出发菌的分离筛选第1页/共38页 2023/5/302向菌种保藏机构索取有关的菌株。 菌种来源的途径国内外著名的菌种保藏机构有： CCCCM (中国微生物保藏管理委员会） ATCC (美国典型菌种保藏中心） NCTC (英国国家典型菌种保藏所) IFO (大阪发酵研究所)2. 从一些发酵制品中分离目的菌株。容易筛选到较理想的菌株。 3. 由自然界采集样品中获得。如土壤、水、动植物 体等，从中进行分离筛选。容易发现新的菌株资源。第2页/共38页 2023/5/303菌株分离与筛选菌株分离(separation)：是将样品中混杂生长的各种微生物通过分离技术区分开，获得所需微生物的过程。菌株筛选(screening)：在目的菌株分离的基础上，结合常规生产性能测定，选择目的产物合成能力相对高的菌株的过程。第3页/共38页 2023/5/304菌株分离和筛选第4页/共38页 2023/5/305第一节 含微生物样品的采集第二节 含微生物样品的富集培养第三节 微生物的分离第四节 野生菌株筛选和目的产物鉴定主要内容第5页/共38页 2023/5/306第一节 含微生物样品的采集第6页/共38页 2023/5/307含微生物样品的采集一、从土壤中采样1 根据土壤特点采集① 土壤有机质含量和通气状况第7页/共38页 2023/5/308典型的土壤层次结构A soil profile ＯＡ BＣ堆积枯枝落叶，下部已初步分解腐殖质含量高，与矿物颗粒紧密结合形成暗色土层物质淋失，颜色较浅淋滤层淋移物质在沉积层沉积，多形成核状、柱状、棱状结构，较紧实土层较深，受成土因素影响小，保持母质特性第8页/共38页 2023/5/309不同土壤类型第9页/共38页 2023/5/3010③ 地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多。④ 季节条件 秋季是采样的良好季节② 土壤的酸碱度 第10页/共38页 2023/5/3011 2 土壤中采样的方法选点取土装袋标记用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5-25cm处的土样10-25g，记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件第11页/共38页 2023/5/3012二、根据微生物生理特点采样① 根据微生物营养类型 微生物的营养需要和代谢类型与其生长环境有着很大的相关性。 在筛选一些具有特殊性能的微生物时，需根据该微生物独特的生理特性到相应的地点采样。② 根据微生物的生理特性第12页/共38页 2023/5/3013①局部环境条件。如：海洋、肠道、温泉、堆肥② 极端环境条件。 在绝大多数微生物所不能生长的高温、低温、高酸、高碱、高盐或高辐射强度的环境下，也有少数微生物存在，这类微生物被称为极端环境微生物。三、特殊环境下采样第13页/共38页 2023/5/3014第二节 含微生物样品的富集培养第14页/共38页 2023/5/3015 富集(enrichment)培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特点，设计一种选择性培养基，并创造有利的生长条件，使目的微生物在合适的环境下迅速生长繁殖，由原来自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种，以利分离到所需要菌株的过程。 富集培养主要根据微生物的碳源、氮源、pH、温度、需氧情况等生理因素加以控制。第15页/共38页 2023/5/3016一、控制培养基的营养成分 二、控制培养条件 通过对pH、温度及通气量等其他一些条件的特殊要求加以控制培养，达到有效的分离目的。 如 pH 细菌、放线菌：一般要求偏碱(pH7.2-7.5)， 霉菌和酵母菌：要求偏酸(pH4.5-6)。第16页/共38页 2023/5/3017三、抑制不需要的菌类 通过高温、高压、加入抗生素等方法减少非目的微生物的数量，使目的微生物的比例增加，达到富集的目的。如： 硫乙醇酸钠－－造成厌氧环境，利于厌氧菌生长。 抗生素－－可抑制细菌生长，用于培养霉菌。第17页/共38页 2023/5/3018被分离的微生物添加物质及其浓度被抑制的微生物放线菌放线菌酮（50），制霉菌素（50），环己亚氨（50），匹马霉素（50），丙酸钠（4mg）霉菌革兰氏阴性菌其他革兰氏阳性菌环己亚氨+多黏菌素+枯草菌素（各20单位），多黏菌素B（5）+青霉素（1）细菌放线菌酮（50-500），制霉菌素（100），优洛杀菌素（30-100）（eu-rocidin）霉菌、酵母菌原虫霉素（5）原生动物革兰氏阳性菌多黏菌素B（5）革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌青霉素（1），月桂酸钠（2mg）革兰氏阳性菌酵母菌氯霉素（100），青霉素（20