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核型分析步骤 人类体细胞染色体标本制备与核型分析 【实验目的】 1 熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法及染色体标本的制备方法。 2 熟悉人类染色体G显带标本制备与分析。 【实验原理】 染色体是在显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出现的结构。因此必须获得染色体标本才能进行检查分析通常情况下都是利用外周血淋巴细胞进行核型分析。正常情况下人体外周血淋巴细胞不再分裂但植物血凝素PHA可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞使其恢复增殖能力。因此可采取少量外周静脉血做短期培养培养至72小时细胞进入增殖旺盛期此时加入秋水仙素抑制细胞分裂使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备的染色体标本经胰蛋白酶消化、Giemsa染色后可在染色体纵轴上显示出着色深、浅相间的横纹——带表明每条染色体的特征。 【实验用品】 1采血器材、酒精灯、培养瓶、超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、刻度离心管、乳头吸管、试管架、量筒、试剂瓶、载玻片、吹风机、托盘天平、显微镜、镜油、二甲苯、擦镜纸、镊子、烧杯、记号笔、玻片架、火柴、10ml注射器。 2RPMI 1640液体培养基、小牛血清、肝素500 U/ml、植物血凝素PHA、秋水仙素10mg/ml、KCl低渗液0.075mol/L、甲醇、冰乙酸、Giemsa原液、磷酸缓冲液PH6.8。 32.5胰酶溶液Hanks液